[发明专利]一种2’或3’偶联氨基酸的核苷衍生物、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种偶联氨基酸的核苷衍生物，其结构如式1或式2所示：

式1                   式2

其中，B为带有氨基保护基的核苷碱基；

n为1-6的整数；

Linker为C₂-C₁₀的直链烷烃；

R₁为H或甲基；

R₂为碳碳双键、碳碳三键或叠氮基。

2.根据权利要求1所述的核苷衍生物，其中所述的氨基保护基为苯甲酰基、异丙酰基或乙酰基。

3.制备权利要求1或2所述的核苷衍生物的方法，其包括步骤：

1)将核苷溶于水溶性有机溶剂中，在碱的作用下与带氨基的linker偶联得到中间体，柱层析分离2’或3’偶联产物；

2)将步骤1)的偶联产物和氨基酸溶于水溶性有机溶剂中，在脱水剂的作用下发生脱水反应，即得；

其中，步骤1)和步骤2)中所述的水溶性有机溶剂包括DMF、DMSO、THF、1，4-二氧六环、吡啶或乙腈；步骤1)中所述的碱包括氢化钠、碳酸钾、叔丁醇钾、DMAP或二乙胺；步骤2)中所述的氨基酸，其侧链末端带有碳碳双键、碳碳三键或叠氮基；步骤2)中所述的脱水剂包括DCC、DIC或EDCI。

4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤1)中所述的带氨基的linker包括：

其中，n1＝0-8。

5.根据权利要求3所述的方法，其中步骤2)中所述的氨基酸包括：

其中，n2为1-6的整数。

6.根据权利要求3-5任意一项所述的方法，具体步骤如下：

1)将真空干燥的核苷溶于预先干燥的水溶性有机溶剂中，控制温度在0-10℃之间，加入相当于1-3倍核苷物质的量的碱，搅拌10-30min，缓慢滴加相当于0.5-1.5倍核苷物质的量的带氨基的linker，5-30min内滴加完毕，室温搅拌8-24h；向体系中加入相当于2-6倍核苷物质的量的水，淬灭反应，旋干溶剂，柱层析分离2’偶联产物和3’偶联产物；

2)将步骤1)的偶联产物和氨基酸按1∶1-3物质的量比溶于预先干燥的水溶性有机溶剂中，搅拌均匀，向体系中加入相当于2-5倍核苷物质的量的脱水剂，室温下搅拌6-12h；向体系中加入相当于4-10倍核苷物质的量的水，淬灭反应，滤除生成的固体，将滤液旋干，柱层析分离得到目标产物。

7.权利要求1或2所述的核苷衍生物在提高siRNA稳定性中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其采用如下方式进行：

1)选择靶基因，确定siRNA的正义链和反义链的序列；

2)通过常规的固相合成方法，合成需要被锁定的siRNA，并在合成过程中将2’-或3’-位含末端双键的核苷衍生物连接到两条siRNA链的3’端和5’端；

3)在Grubbs催化剂的作用下发生烯烃复分解反应，将两条siRNA链锁定；

4)被锁定的siRNA进入细胞后，经细胞内Dicer酶的剪切和加工后释放被锁定的siRNA，从而对靶基因的表达进行抑制。

9.根据权利要求7所述的应用，其采用如下方式进行：

1)选择靶基因，确定siRNA的正义链和反义链的序列；

2)通过常规的固相合成方法，合成需要被锁定的siRNA，并在合成过程中将2’-或3’-位含末端三键和叠氮基的核苷衍生物连接到两条siRNA链的3’端和5’端；

3)在CuI的催化下，将两条siRNA链锁定；

4)被锁定的siRNA进入细胞后，经细胞内Dicer酶的剪切和加工后释放被锁定的siRNA，从而对靶基因的表达进行抑制。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其中所述的锁定的双链siRNA的两端偶联有荧光基团、靶向识别分子或脂类分子。