[发明专利]大肠杆菌AppA肌醇六磷酸酶突变体

权利要求书

1.一种具有改良的肌醇六磷酸酶活性的重组肌醇六磷酸酶，所述 重组肌醇六磷酸酶含有对应于附图12中称为EBC18B2的成熟大肠 杆菌肌醇六磷酸酶的第26位残基的氨基酸残基的修饰，其中所述 的重组肌醇六磷酸酶是附图12中的HY679及其成熟形式。

2.根据权利要求1的重组肌醇六磷酸酶，其中所述修饰是替换。

3.一种编码权利要求1中所述重组AppA肌醇六磷酸酶的多核苷 酸，还包括在芽孢杆菌物种中可操作的分泌信号序列。

4.一种含有编码权利要求1的肌醇六磷酸酶的序列的表达构建 体，还包括权利要求3的信号分泌序列。

5.一种含有权利要求4的表达构建体的载体。

6.一种经权利要求5的载体转化的宿主细胞。

7.权利要求6的宿主细胞，其中所述细胞是芽孢杆菌属物种。

8.权利要求7的宿主细胞，其中所述细胞是枯草芽孢杆菌。

9.一种生产具有改良的肌醇六磷酸酶活性的酶的方法，包括：

a)提供一种经权利要求4的表达构建体转化的宿主细胞；并

b)在适于所述细胞产生所述肌醇六磷酸酶的条件下培养所述宿主 细胞。

10.权利要求9的方法，还包括：

c)回收所述肌醇六磷酸酶。

11.权利要求9的方法，其中所述宿主细胞是芽孢杆菌属物种。

12.权利要求11的方法，其中所述宿主细胞是枯草芽孢杆菌。

13.一种生产具有改良活性的权利要求1所述重组肌醇六磷酸酶 的方法，所述方法包括：

a)提供一种含有编码AppA肌醇六磷酸酶或其天然变异体的 序列的核酸；

b)对所述核酸进行易出错扩增；

c)用含有所述扩增的产物的表达构建体转化宿主细胞，其中 所述的产物含有对应于附图12中HY679的氨基酸的修饰；并

d)在适于所述细胞表达所述扩增产物的条件下培养所述宿主 细胞。

14.权利要求13的方法，其中所述宿主细胞是枯草芽孢杆菌。

15.权利要求13的方法，还包括：

e)回收所述肌醇六磷酸酶。