[发明专利]海胆棘壳色素的制备方法

权利要求书

1.海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于操作步骤为：

(一)原料的预处理：去除性腺的海胆棘壳，用清水冲洗，烘干后，粉碎至粒度达到20～200目备用；

(二)研磨：用0.5～10％(w/w)研磨助剂和上述粉碎后的海胆棘壳粉混匀后采用研磨机研磨10～120分钟；

所述研磨助剂为柠檬酸或磷酸二氢钠；

(三)海胆棘壳色素的提取与纯化：

(1)研磨后的海胆棘壳与研磨助剂混合物用5～30倍体积的酸性溶液浸提，浸提温度10～60℃，浸提时间为0.1～10h，浸提液经过滤除去不溶颗粒杂质后于10～60℃真空浓缩，得膏状母液；

所述酸性浸提液为含有酸、有机溶剂的水溶液，其体积百分比为：

酸            5～20

有机溶剂      25～30

水            50～65

所述酸为甲酸、乙酸或盐酸；所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮；

(2)将夹带剂无水乙醇和上述膏状母液按质量比1∶100～100∶1的比例均匀混合后加入萃取釜，CO₂经冷凝升压后进入萃取釜，控制萃取温度30～60℃，压力20～50MPa，萃取时间0.5～8小时，萃取后的溶剂进入分离釜，一级分离温度30～60℃，分离压力8～20MPa，二级分离温度30～40℃，分离压力2～7MPa，得到含有海胆棘壳色素的溶液，减压浓缩后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。

2.根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(1)中所得到的膏状母液用大孔树脂进行提取海胆棘壳色素粗品，吸附洗脱条件及步骤为：

(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5～1∶20，膏状色素母液用浓度为0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后进行吸附，吸附温度为10～60℃，树脂吸附溶液的pH为1～5，吸附流速1～20BV/h；

所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂； 

(2)用1～3倍柱床体积的纯水或含有1～30％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，此洗脱液弃去，以除去无机盐、糖、蛋白杂质；

(3)用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30％～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2～5个柱床体积，洗脱流速1～20BV/h，收集洗脱部分，10～60℃减压浓缩至无乙醇味后经冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素粗品粉末。

3.根据权利要求1所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于在操作步骤(三)海胆棘壳色素的提取与纯化中的(2)中所得到的紫红色海胆棘壳色素粗品粉末用大孔树脂进行再次提纯，吸附洗脱条件及步骤为：

(1)大孔树脂装柱径高比为1∶5～1∶20，海胆棘壳色素粗品粉末用0.2％(w/v)的盐酸溶液稀释至吸光值为2后吸附，吸附温度为10～60℃，树脂吸附溶液的pH为1～5，吸附流速1～20BV/h；

所述大孔树脂为NKA-9、NKA-II、D101或D4020型号树脂；

(2)用1～3倍柱床体积的纯水或含有1～30％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，以除去无机盐、糖、蛋白杂质；

(3)用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的30～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱2～5个柱床体积，洗脱流速1～20BV/h，收集洗脱部分，10～60℃减压浓缩至无乙醇味后冷冻干燥得紫红色海胆棘壳色素纯品粉末。

4.根据权利要求1、2或3所述的海胆棘壳色素的制备方法，其特征在于精制海胆棘壳色素，其操作步骤为：

将海胆棘壳色素粉末用甲醇溶解至饱和后上C18或C8反相柱分离纯化，用含有0～5％(w/v)盐酸、甲酸、乙酸或三氟乙酸的5～100％(v/v)甲醇、乙醇、丙酮或乙腈的水溶液洗脱，分别收集不同海胆棘壳色素所在洗脱峰的洗脱液，经浓缩结晶即得海胆棘壳色素纯品，其纯度＞95％。