[发明专利]生产盾壳霉菌分生孢子的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法。

背景技术

盾壳霉是防治油菜菌核病的生防菌，可作为高效生物农药。盾壳霉应用于生产实践的首要前提是得到大量的有活性的分生孢子。研究发现，盾壳霉在液体发酵条件下不产生分生孢子，半固体条件下产孢量极少或不产孢；利用PDA平板固体培养盾壳霉可产生大量的分生孢子，但此生产方式不便用于工业扩大培养生产。还有另外一种方法，就是使用小麦、燕麦、大麦等作为基质培养盾壳霉，由于这些基质含有大量的碳、氮源，可使盾壳霉产生大量分生孢子，且可直接用于工业发酵罐扩大培养生产，也相对简化了分生孢子制剂制作的后续工序。但由于基质价格昂贵，培养成本高，不利于推广应用。

发明内容

为了克服现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种以农业废弃物为原料，生产盾壳霉菌分生孢子的方法，本发明是这样实现的：

一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：

(1)基质准备：将农业废弃物粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；

(2)按照基质与发酵液重量比为1∶3至1∶5的范围称取基质与发酵液，混合均匀，放置3～6小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；

(3)孢子悬浮液制备：取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×10⁶个/ml的孢子悬浮液；

(4)接种：吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；

(5)培养：控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养20天～26天，即制得盾壳霉菌分生孢子。

更进一步的方案是：所述的农业废弃物为谷壳、玉米杆、油菜杆、稻草、玉米芯、小麦杆、麸皮中的一种或几种。

更进一步的方案是：所述的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH₂PO₄、MgSO₄、ZnSO₄、MnCl₂、CuSO₄的水溶液，pH值为6.5，其中KH₂PO₄、MgSO₄、ZnSO₄、MnCl₂、CuSO₄的总浓度为1g/L。

本发明采用农业废弃物制备盾壳霉菌分生孢子，经过测定，最终产孢量达到1.58×10⁹～6.0×10⁹个/克基质，与单一小麦发酵产孢量无显著差异。但本发明克服了现有技术中成本高的缺陷，成本非常低，可以利用农业废弃物，且生产效果非常好。

具体实施方式

实施例一

一种生产盾壳霉菌分生孢子的方法，包括如下步骤：

(1)基质准备：将玉米杆粉碎，使粉碎后废弃物颗粒长度不超过8mm，50℃烘干机烘干至恒重；

(2)按照基质与发酵液重量比为1∶4的标准称取基质与发酵液，混合均匀，放置4小时后，湿热灭菌1小时，冷却，制得基质混合物；

(3)孢子悬浮液制备：取活化培养后的盾壳霉，水洗分生孢子，稀释成孢子数量为1×10⁶个/ml的孢子悬浮液；

(4)接种：吸取1ml孢子悬浮液放入到步骤(2)制得的基质混合物中，震荡混匀，放置在生化培养箱中培养；

(5)培养：控制培养条件为20℃、黑暗条件，每天振荡容器一次，震荡一周，一周以后静止培养，总计培养23天，即制得盾壳霉菌分生孢子。

其中的发酵液为含有10g/L的蔗糖和10g/L的蛋白胨，以及少量KH₂PO₄、MgSO₄、ZnSO₄、MnCl₂、CuSO₄的水溶液，pH值为6.5，其中KH₂PO₄、MgSO₄、ZnSO₄、MnCl₂、CuSO₄的总浓度为1g/L。