[发明专利]野山参与栽培参多重PCR检测试剂盒及鉴定方法

权利要求书

1.一种野山参与栽培参多重PCR检测试剂盒，其特征是，它包含：

(a)鉴定反应体系：总体系为100μL，其中含有缓冲液10μL，12.5mMdNTP 4-10μL，0.1mM引物1和引物2的一种1.5-4.0μL，Taq DNA聚合酶2-10μL，待检样本DNA 2-5μL，余为双蒸馏水；

(b)阳性对照反应体系：总体系为100μL，其中含有缓冲液10μL，12.5mM dNTP4-10μL，0.1mM引物1和引物2的一种1.5-4.0μL，Taq DNA聚合酶2-10μL，野山参与栽培参DNA按1∶1混合物2-5μL，余为双蒸馏水；

(c)阴性对照反应体系：总体系均为100μL，含有缓冲液10μL，12.5mMdNTP 4-10μL，0.1mM引物1和引物2的一种1.5-4.0μL，Taq DNA聚合酶2-10μL，五加科同属植物DNA 1∶1混合物2-5μL，余为双蒸馏水。

2.一种野山参与栽培参DNA鉴定方法，其特征是，它包含下述步骤：

(1)设计野山参与栽培参线粒体DNA二对特异寡核苷酸引物，如下引物1和引物2中的一种：

引物1

5’TACACATGTAACTGTAACTCTAC  3’

5’GCAGATCATCTACAGCTAACGA  3’

引物2

5’CGACCCAGACTCGTGAGAGTC  3’

5’ATCGTCATATTAGATAGCTCAT  3’

(2)人工合成野山参与栽培参线粒体DNA对特异寡核苷酸引物，采用ABI3900高通量合成仪，固相亚磷酰胺三酯合成；

(3)确定反应程序

分别将野山参与栽培参DNA检测试剂盒的(a)鉴定反应体系、(b)阳性对照反应体系和(c)阴性对照反应体系的总体系各100μL加入反应管中，置于PCR反应仪中按下列程序进行：

94℃预变性3-7min，94℃ 30s，退火57℃ 30s，72℃ 1min-30s，30个循环，72℃延伸5-8min，4℃；

(4)结果判定

反应产物使用1.5-1.8％琼脂糖凝胶，在DYY-III型水平电泳仪上电泳，60-70mV电泳45min-1h，分子量100-1500bp的DNA Marker作参照，凝胶成像分析系统观察和分析得出结果。