[发明专利]一种特异抑制Rab27B基因表达的DNA片段及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种特异抑制Rab27B基因表达的DNA片段 及其应用。

背景技术

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种常见的、致死率极高的恶 性肿瘤，每年约650,000人死于HCC，且其发病率有增高的趋势。该病多发于东南亚 和非洲，其中约有50％以上发生于中国，位居我国癌症死亡率的第二位。HCC早期诊断 较难，病情进展快，预后水平低。手术切除一直被认为是HCC获得根治的最佳手段， 但是仅有10-20％的病人适合通过手术来干预；除此之外，即使是根治性切除，5年内 仍有60-70％的病人会出现转移复发而危及生命，而局部治疗的转移复发率则更高。HCC 的转移是影响治疗效果和预后的最大障碍，是导致其高死亡率的主要原因。

近年来，针对HCC的转移进行了大量研究并找到了许多重要的分子，如：黏附分 子、细胞骨架及调节蛋白、基质降解酶、癌基因及抑癌基因、血管生成的调控因子、 肿瘤免疫相关分子等。也即HCC的转移过程与肿瘤细胞的黏附运动、细胞增殖、细胞 外基质、机体免疫、肿瘤血管生成等多因素有关。尽管对HCC转移进行了大量研究， 但目前HCC转移的分子机制仍不明确，尚未发现预测HCC复发转移的分子标志物和有 效的治疗靶标。

Rab27B是Rab家族中Rab27亚族成员，Rab家族在细胞内发挥着非常广泛的生物 学功能，包括细胞的分泌、胞吞、信号转导及发育。Rab GTPase是机体内一组与内膜 运输相关的调节蛋白。Rab家族在肿瘤的生长和转移过程中发挥了重要的作用，如： Rab20在胰腺癌中高表达，在肿瘤的生长过程中发挥了重要的作用；Rab23和Rab5a 在肝细胞癌中高表达，在HCC的生长和增殖过程中，发挥了重要的作用，其中Rab5a 在EGF信号通路中起了重要作用；Rab25介导的信号通路在卵巢癌的细胞增殖和凋亡 的调控中发挥了重要的作用；Rab25可以通过指引整合素循环囊泡的定位以及增强肿 瘤细胞侵袭胞外基质的能力来加速肿瘤的生长。

Rab27亚族包括两个成员：Rab27A和Rab27B。Rab27A与Griscelli Disease有 关，在溶酶体样细胞器中起了重要的作用。研究发现Rab27A和Rab27B在序列和结构 上有高度的保守性。两者在功能上也有一定的相似性。乳腺癌中Rab27a的过表达，增 强了肿瘤的侵袭能力和转移潜能，与胰岛素样生长因子2的分泌相关。目前为止尚未 见到其与肿瘤的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种小干扰RNA。

本发明提供的小干扰RNA是序列表中序列4和5所示的核苷酸序列组成的双链 RNA。

编码上述的小干扰RNA的DNA片段也属于本发明的保护范围之内。

上述的DNA片段，如式I所示：

SEQ_正向-X-SEQ_反向

(I)

其中，SEQ_正向的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

SEQ_反向与所述SEQ_正向反向互补；

X是SEQ_正向与SEQ_反向之间的间隔序列，X与所述SEQ_正向或者X与SEQ_反向均不互补。

上述X是内含子，所述内含子的核苷酸序列如序列表中序列3所示。

含有上述DNA片段的重组载体也属于本发明的保护范围之内。

上述重组载体是将上述的DNA片段插入GCsilencer^TMU6/Neo/GFP载体的多克隆位 点构建成的重组表达载体。

上述小干扰RNA、上述DNA片段或者上述的重组载体在制备抑制Rab27B基因表达 产品中的应用也属于本发明的保护范围之内。

上述Rab27B基因是如下1)或2)：

1)核苷酸序列如序列表中序列1的自5’端第112-768位所示；

2)核苷酸序列如序列表中序列1所示。

上述小干扰RNA、上述DNA片段或者上述的重组载体在制备治疗肝细胞癌细胞转 移的抑制剂中的应用也属于本发明的保护范围之内。