[发明专利]一种测定银杏提取物中总银杏酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种银杏提取物中总银杏酸的测定方法。

背景技术

银杏(Ginkgo Biloba)是现存种子植物中最古老的一种，也是可 上溯到2亿多年前二世纪时的银杏家族的唯一的幸存者。在中国，银 杏制剂用于治疗已有5000多年了，也就是说，从中草药的最早起源 就开始用于治疗了。自六十年代以来，银杏叶的植物提取物在很多国 家用于治疗脑血管及周围血管疾病，如德国、法国、日本和韩国。

银杏叶的主要成分是黄酮类化合物，它包括至少14种不同的化 合物，例如黄酮醇、黄酮、黄烷酮和双黄酮等等，在这些化合物中， 黄酮苷和黄酮醇苷包括山奈素、槲皮素和异鼠李素与葡萄糖或鼠李糖 结合物，是市场上用于治疗目的的银杏提取物(Tebonin、Tanakan、 Roekan或EGb761)中最显著的部分，实验表明黄酮苷和黄酮醇苷为 有力的抗氧剂，可清除氧自由基从而避免由于年龄老化而引起的细胞 和组织损伤，它们会严重影响大脑功能，包括记忆力和注意力。另外 黄酮苷和黄酮醇苷也可以改善周围血管循环。

另外，除银杏黄酮外，银杏叶中另一活性成分是帖内酯，包括银 杏内酯A、B、C、J、M和白果内酯，银杏内酯为含内酯结构的帖类。 最近发现由于它们拮抗血小板活化因子(PAF)的特性，银杏内酯A、 B、C、M特别是白果内酯能有效地治疗血小板活化因子诱发疾病如 哮喘、支气管炎、老年性痴呆、过敏、心功能失调、风湿病等等以及 其它循环系统疾病。

除上述化合物外，银杏叶至少含有12种烷基酚酸化合物，包括 银杏酸，它是6-烷基水杨酸，烷基为正13碳到正19碳有0-3个双键 的烷基基团。银杏酸是银杏提取物毒性作用的因素，这些毒性作用包 括胃肠道副作用、头痛、皮肤刺激和水肿。六十年代以来，已有多例 接触过银杏叶和果实后出现过敏反应的报告，因此对银杏酚酸的准确 测定对银杏类制剂，尤其是注射剂的安全性显得十分的重要。

《中国药典》2005版中对总银杏酸含量测定，在供试品溶液的 制备中，直接取银杏提取物粉末约10g，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入石油醚(60～90℃)50ml，称定重量，回流提取2小时，放 冷，再称定重量，用石油醚(60～90℃)补足减失的重量，摇匀，滤 过。精密量取续滤液25ml，减压回收溶剂至干，精密加入甲醇2ml， 密塞，摇匀，即得。色谱分析条件∶色谱柱为十八烷基键合硅胶为填 充剂，流动相为甲醇-1％冰醋酸(90∶10)；流速1mL/min，检测波 长为310nm。本法取样量大，测定结果受到样品性状的影响比较大，， 如果样品吸潮，发粘测定的结果会明显偏低，回流时间长。

《药学学报》2003年第38卷第11期的论文“高效液相色谱法 测定银杏叶提取物及其制剂中银杏酸的含量”，报道了银杏叶提取物 及其制剂经石油醚提取，提取液浓缩后用石油醚定容，HPLC直接测定. 色谱分析条件∶色谱柱为Inertsil ODS-2，流动相为甲醇-3％冰醋酸溶液 (92∶8)，流速1.0mL/min，柱温40℃，紫外检测波长310nm。

《分析化学研究简报》2004年第32卷第5期的论文“银杏酸的分光 光度法测定”，报道了银杏酸粗提物经硅胶柱色谱一次预净化处理后， 分光光度法在242nm或310nm波长测银杏酸，与在310nm波长处用 HPLC法测量的结果相当。色谱分析条件∶色谱柱为Inertsil ODS-2， 流动相为甲醇-3％冰醋酸溶液(92∶8)，流速1.0mL/min，柱温40℃， 紫外检测波长310nm。其间需要制成几个浓度的标准溶液，测定吸光 度做标准曲线；样品经硅胶柱色谱一次预净化处理；银杏酸单体的制 备及吸光系数的测定，操作比较复杂。

由于现有文献对银杏提取物总银杏酸的提取测定缺乏系统的研 究，而且分析样品制备的提取方法也存在样品取样量大、提取回流时 间长、测定结果偏低的缺点，所以有必要寻求更有效测定银杏提取物 中总银杏酸的方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种取样量小， 分散均匀，比较准确的银杏提取物中总银杏酸的测定方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种测定银杏提取物中总银杏酸的方法，包括以下步骤：

a、取白果新酸对照品，加甲醇制成定量用对照品溶液；另取总银杏 酸对照品，加甲醇制成定位用对照品溶液；