[发明专利]一种DNA提取试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种DNA提取试剂盒及其应用。

背景技术

每种微生物均有其本身特有的、稳定的DNA组成结构，不同种微生物间基因组序列的差异程度代表它们之间亲缘关系的远近。测定每种微生物具有代表性的DNA数据，对微生物鉴定工作十分重要，而微生物基因组DNA的提取是工作的基础。

常规使用的SDS/酚/氯仿的基因组DNA提取方法，不仅操作复杂、耗时长，而且使用了大量挥发性有机物，产生大量的有毒废液。

发明内容

本发明的目的是提供一种DNA提取试剂盒及其应用。

本发明提供的DNA提取试剂盒，包含试剂A、试剂B、试剂C、试剂D、试剂E和试剂F；

所述试剂A由NaCl和水组成；每100mL试剂A含有0.7-1.0g NaCl；

所述试剂B由Tris(三羟甲基氨基甲烷)、异硫氰酸胍、反式-1，2-环己二胺四乙酸(cydta)和水组成；试剂B中，异硫氰酸胍的终浓度为3-5mol/L，Tris的终浓度为30-50mmol/L，反式-1，2-环己二胺四乙酸的终浓度为4-6mmol/L；

所述试剂C由40-60体积份硅藻土和60-40体积份溶液甲组成；溶液甲由Tris、EDTA(己二胺四乙酸)和水组成；溶液甲中，Tris的终浓度为5-15mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-2mmol/L；

所述试剂D由Tris、EDTA、NaCl、乙醇和水组成；试剂D中，乙醇的终浓度为60-70％(体积百分含量)，Tris的终浓度为15-25mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-2mmol/L，NaCl的终浓度为350-450mmol/L；

所述试剂E由乙醇和水组成；试剂E中，乙醇的终浓度为70-75％(体积百分含量)；

所述试剂F由Tris、EDTA和水组成；试剂F中，Tris的终浓度为5-15mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-2mmol/L。

所述试剂A可采用如下方法制备：将NaCl溶于水得到试剂A；每100mL试剂A含有0.7-0.8g NaCl或0.8-1.0g NaCl。

所述试剂B可采用如下方法制备：将Tris溶于水，用盐酸调节pH至7.5，制得Tris-HCl溶液；将异硫氰酸胍和反式-1，2-环己二胺四乙酸溶于水后，再加入所述Tris-HCl溶液，得到试剂B；试剂B中，异硫氰酸胍的终浓度为3-4mol/L或4-5mol/L，Tris的终浓度为30-40mmol/L或40-50mmol/L，反式-1，2-环己二胺四乙酸的终浓度为4-5mmol/L或5-6mmol/L。

所述试剂C可采用如下方法制备：将40-45体积份硅藻土和60-55体积份溶液甲混合，或将45-60体积份硅藻土和55-40体积份溶液甲混合，得到试剂C；溶液甲的配制方法如下：将Tris溶于水，用盐酸调节pH至7.5，制得Tris-HCl溶液；将EDTA溶于水，用盐酸调节pH至7.5，制得EDTA溶液；将所述Tris-HCl溶液和所述EDTA溶液混合，得到溶液甲；溶液甲中，Tris的终浓度为5-10mmol/L或10-15mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-1mmol/L或1-2mmol/L。

所述试剂D可采用如下方法制备：将Tris溶于水，用盐酸调节pH至7.5，制得Tris-HCl溶液；将EDTA溶于水，用盐酸调节pH至7.5，制得EDTA溶液；将NaCl溶于水，加入所述Tris-HCl溶液和所述EDTA溶液，再加入乙醇，得到试剂D；试剂D中，乙醇的终浓度为60-65％(体积百分含量)或65-70％(体积百分含量)，Tris的终浓度为15-20mmol/L或20-25mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-1mmol/L或1-2mmol/L，NaCl的终浓度为350-400mmol/L或400-450mmol/L。

所述试剂E可采用如下方法制备：将乙醇溶于水，得到试剂E；试剂E中，乙醇的终浓度为70-75％(体积百分含量)。

所述试剂F的制备方法如下：将Tris溶于水，用盐酸调节pH至8.0，制得Tris-HCl溶液；将EDTA溶于水，用盐酸调节pH至8.0，制得EDTA溶液；将所述Tris-HCl溶液和所述EDTA溶液混合，得到试剂F；试剂F中，Tris的终浓度为5-10mmol/L或10-15mmol/L，EDTA的终浓度为0.5-1mmol/L或1-2mmol/L。