[发明专利]聚乙二醇-聚唾液酸嵌段共聚物的制备方法及应用

权利要求书

1.一种聚乙二醇一聚唾液酸嵌段共聚物的制备方法，其特征在于由活化的 聚唾液酸与异基双功能聚乙二醇连接而成，表示为X-PEG-F-PSA，其中：X为 异基双功能PEG的活性基团之一，用于连接蛋白质或多肽上的活性基团；F为 异基双功能PEG另一个活性基团，用于连接活化的聚唾液酸PSA；嵌段共聚物 X-PEG-F-PSA与蛋白质Protein连接，形成“Protein-PEG-PSA”产物；

异基双功能PEG的X活性基团选择各种琥珀酰酯NHS；所述NHS为：琥 珀酰亚胺羧甲基酯，琥珀酰亚胺碳酸酯，琥珀酰亚胺戊二酸酯，琥珀酰亚胺琥 珀酸酯，琥珀酰亚胺丙酸酯；

异基双功能PEG的F活性基团为能与巯基连接的基团：顺丁烯二酰亚胺基 团MAL；

工艺为：

(1)活化聚唾液酸PSA-SH的制备：

将纯化的聚唾液酸80mg溶于pH7.4、20mM的8mL磷酸缓冲液中，在4℃ 预冷，然后加入胱胺二盐酸盐，聚唾液酸∶胱胺二盐酸盐摩尔比为1∶100，滴 加少量0.5M的氢氧化钠调pH为7.4，在4℃下磁力搅拌2天，再加入二硫苏糖 醇至终浓度为50mM，4℃下反应1h，反应液用10KDa超滤管3000g×30min超 滤3次，换缓冲体系为pH7.4、PBS缓冲液，浓缩得到的即为活化聚唾液酸 PSA-SH，其末端官能团为巯基；

(2)“Protein-PEG-PSA”的制备：

(a)先合成PSA-PEG嵌段共聚物，再修饰蛋白：

选择异基双功能PEG交联剂：顺丁烯二酰亚胺-聚乙二醇-琥珀酰酯 MAL-(PEG)_n-NHS，其中n的范围在2～200之间；该MAL-(PEG)_n-NHS溶于 DMSO，加入过量步骤(1)新制备的PSA-SH，室温下反应30min，7K透析膜 透析出去有机溶剂，冷冻干燥，即得NHS-PEG-PSA；

然后用于修饰蛋白质Protein：将2mg/mL Protein溶于pH7.0～9.0磷酸缓冲 液中，4℃下预冷30min，加入NHS-PEG-PSA，NHS-PEG-PSA∶Protein摩尔比 为10～20∶1，在4℃下磁力搅拌1h，反应液用10KDa超滤管3000g×30min超滤 3次，浓缩、冻干得到的产品即为“Protein-PEG-PSA”；

或(b)PSA连接到Protein-PEG中PEG活性末端：

选择异基双功能PEG交联剂：MAL-(PEG)_n-NHS，其中n的范围在2～200 之间，该功能MAL-(PEG)_n-NHS连接到蛋白质上的ε-氨基，形成 Protein-PEG-MAL：将2mg/mL的Protein溶于pH7.0～9.0磷酸缓冲液中，4℃下 预冷30min，加入MAL-(PEG)_n-NHS，MAL-(PEG)_n-NHS∶Protein摩尔比为10～20 ∶1，在4℃下磁力搅拌1h，反应液用10KDa超滤管3000g×30min超滤3次， 浓缩得到的即为Protein-PEG-MAL；

然后将新制备的Protein-PEG-MAL反应液在4℃下预冷30min，加入步骤(1) 中新制备的PSA-SH，PSA-SH：Protein-PEG-MAL摩尔比为15～20∶1，补加磷 酸缓冲液使反应液处于合适的浓度，在4℃下反应30min，反应液用10KDa超 滤管3000g×30min超滤3次，浓缩、冻干得到的产品即为“Protein-PEG-PSA”。

2.根据权利要求1所述的聚乙二醇-聚唾液酸嵌段共聚物的制备方法，其 特征在于，修饰的蛋白质，形成“Protein-PEG-PSA”产物，PEG在蛋白质与PSA 之间，PSA在外面，结构式如下：

3.权利要求1所述的制备方法制得的聚乙二醇-聚唾液酸嵌段共聚物的应 用，其特征在于，用于含氨基的生物功能分子的修饰，利用PEG的强大水合性 能和PSA的免疫原性，将小分子量PEG与PSA相连接再修饰各种蛋白质或多 肽药物，用于改进药物的溶解性、稳定性和免疫原性，以延长药物的半衰期， 提高疗效。

4.根据权利要求3所述的聚乙二醇-聚唾液酸嵌段共聚物的应用，其特征 在于，所述的用于含氨基的生物功能分子的修饰，所述的含氨基的生物功能分 子为蛋白质或多肽大分子。