[发明专利]南非Ⅱ型口蹄疫抗原表位多肽及其筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体地说，涉及南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位上的六条多肽及筛选方法。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)引起的偶蹄动物的一种急性、高度接触性传染病，一度被世界动物卫生组织(OIE)列为A类疫病之首。口蹄疫属于世界流行性传染病，它的暴发给全球人类健康以及畜牧业生产造成了极大的危害。

口蹄疫病毒属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒(aphthovirus)属。FMDV是由单股正链RNA组成的140S颗粒，它由VP1(1D)、VP2(1B)、VP3(1C)和VP4(1A)四种结构蛋白各60拷贝组成。FMDV基因组全长约8500bp，依次由5′UTR、ORF和3′UTR及Poly(A)尾组成。5′UTR长约1300bp，它包括在病毒翻译和RNA复制中起作用的5个功能区：S片段、Poly(C)、cre区、IRES(内部核糖体进入位点)等。3′UTR可以结合参与RNA复制某些小RNA病毒蛋白，因此它对于病毒基因组复制具有重要作用。Poly(A)尾可能也在FMDV翻译和小RNA病毒的RNA复制中起作用。FMDV的ORF长约6500bp，由L基因、P1结构蛋白基因、P2和P3非结构蛋白基因以及起始密码子和终止密码子组成，编码一个大的聚蛋白。L区包括Lab、Lb两种蛋白。结构蛋白P1区包含了FMDV的主要抗原位点。P1基因编码4种病毒的结构蛋白，即VP1、VP2、VP3和VP4。VP1～VP3组成衣壳蛋白亚单位，VP4位于病毒颗粒内部。P2基因编码3种病毒的非结构蛋白，2A、2B、2C。P3基因编码非结构蛋白3A、Vpg、3C^pro和3D^pol。

目前，关于FMDV结构蛋白的研究主要集中在VP1上，对VP1结构和功能的研究表明，FMDV的O、A、C型和Asia I型，其主要抗原位点都在VP1上。VP1暴露于病毒颗粒的表面，承受的选择压力最大，关键氨基酸的改变可导致抗原位点和单克隆抗体反应性的改变，使得VP1最容易发生变异，其变异常可导致毒株抗原性的变化，在口蹄疫免疫预防、遗传演化中一直是研究的主要对象。但目前已有研究表明，在病毒的抗原结构中VP1～VP3都显示了重要作用。Archarya对FMDV颗粒空间构型的研究表明，VP1～VP3都有氨基酸位于病毒粒子表面，都能参与抗原位点的形成。

口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂，不同的血清型有着不同的抗原位点。在口蹄疫病毒的七个血清型中，以O、A、C和Asia I型的抗原位点研究最多，而对南非型的研究较少。在FMDV的四种结构蛋白VP1、VP2、VP3、VP4中，VP1是诱导产生中和抗体的主要成分，VP1上的G-H环和保守的RGD(Arg-Gly-Asp)基序参与构成了重要的抗原位点。此外，对FMDV空间构型的研究发现VP2、VP3都能参与抗原位点的形成。

发明内容

本发明的目的是提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位的六条多肽。

本发明的另一目的是提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位六条多肽的筛选方法。

为了实现本发明目的，本发明提供南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位的六条多肽，分别位于抗原VP1的132～146和199～211位点；VP2的60～73和163～176位点；VP3的58～71和127～140位点，其氨基酸序列分别为：GECKYTQTSTAIRGD、HQSRDRFDAPIGV；RFFKEKLFDWTSDK、LGVNRHDQGKRHQA；DGKPYVVTKNNGDK、PGVNTDELPKTPEA，或这六条氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

前述的南非II型口蹄疫病毒主要抗原表位六条多肽的筛选方法，包括如下步骤：1)采用软件分析南非II型口蹄疫病毒的三种结构蛋白VP1、VP2和VP3的氨基酸特性，根据这些氨基酸特性设计并合成多肽片段；2)对合成的多肽进行抗原性分析，筛选出6条多肽，其氨基酸序列分别为：GECKYTQTSTAIRGD、HQSRDRFDAPIGV、RFFKEKLFDWTSDK、LGVNRHDQGKRHQA、DGKPYVVTKNNGDK和PGVNTDELPKTPEA。

前述的方法，其中合成多肽的抗原性分析包括反应原性检测及免疫原性检测。

前述的方法，其中反应原性检测采用间接ELISA法。

南非II型口蹄疫主要抗原表位的六条多肽在检测南非II型口蹄疫病毒中的应用。