[发明专利]一种检测牛奶中青霉素残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，涉及牛奶中残留抗生素的检测方 法，特别是涉及一种检测牛奶中青霉素残留量的方法。

背景技术

工业化奶牛养殖中，经常使用抗生素治疗牛乳腺炎和其他乳牛疾病，这 些抗生素不可避免地会转移到最初几天的牛乳中。牛乳中残留的抗生素会对 乳制品品质带来严重的影响。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)的食 品法对牛奶中抗生素最高残留限量都有明确规定，欧盟亦对最大残留量(MRL) 作了详细的规定。我国农业部2001年颁布实施了《无公害食品生鲜牛乳行 业标准》，对新鲜牛乳的卫生指标明确了“抗生素不得检出”。

青霉素，因其高效、低毒是目前兽医学临床上应用最受青睐的药物之一。 但青霉素对乳酸菌的抑制作用与其他抗生素相比又是最强烈的，而且青霉素 的热稳定性相当好，超过任何一种其他常用抗生素，一般的加热杀菌处理不 能将其完全破坏。牛奶生产中，如果使用含有青霉素残留的生鲜乳生产巴氏 消毒奶和超高温灭菌奶，产品中仍会有相当量的青霉素残留；同时牛奶中青 霉素残留可能会导致人体的各种不良反应，人体对青霉素类抗生素药物的敏 感性下降，增加病原菌对药物的耐药性。

青霉素的检测至今都是该领域的技术难点，原因是青霉素的水溶液不稳 定，会产生降解，且结构中不含活性基团氨基。现有技术中，已应用的青霉 素残留技术有微生物检测法如TTC法，理化检测方法包括色谱法，以及免疫 分析法等。上述方法在检测精密度等方面各有所长，有的灵敏度低、选择性 差；有的操作过程步骤较为繁琐，有的需购置昂贵仪器，但大都存在检测耗 时长、成本高的缺点，给乳品加工企业造成诸多不便。中国发明专利20091 0041985.1(CN101633948)公开的“牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒 检测方法”涉及的是一种以微生物为原理的检测方法，与本发明有本质的不 同。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简便、成本低廉、 检测结果准确的牛奶中青霉素残留量的检测方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

一种检测牛奶中青霉素残留量的方法，包括以下步骤：

1、青霉素的降解及荷移复合物的形成：配制青霉素钠浓度0.01～ 100mg/L的标准工作无水乙醇液，用稀HCl调至pH 2±0.5或4±0.5，沸水 浴10～30min使其降解，得到降解产物青霉胺或青霉烯酸，两种降解产物 再分别与浓度为1×10^-3～10×10^-3mol/L的苯醌类物质在常温下反应5～ 10min，得到荷移复合物，备用；

2、测定波长的选择：将步骤1得到的青霉胺荷移复合物在紫外分光光 度计下测定紫外最大吸收波长，或是将得到的青霉烯酸荷移复合物在荧光分 光光度计下测定荧光的激发和发射光谱；其中，所述的紫外吸收或是荧光的 激发发射波长的测定选择范围为200nm～600nm；

3、针对不同的荷移复合物分别计算吸收光强度与荷移复合物的线性范 围、回收率、标准偏差、检测限和工作曲线；

4、样品前处理：将牛奶样品与脱蛋白、脱脂肪沉淀剂混合均匀，在转 速800～3000r/min条件下离心分离3～10min，取上清液备用；

5、样品测定：取步骤4中的上清液，按照步骤1进行降解、荷移反应， 得到相应的荷移复合物，再按照步骤2的要求测定紫外最大吸收波长或荧光 的激发和发射光谱，计算该荷移复合物的吸收度，代入步骤3所得的该类荷 移复合物的工作曲线中即可求得牛奶中青霉素的残留量。

步骤(1)中以水、甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种作为反应介质； 所述的苯醌类物质为苯醌、甲氧基苯醌、四氯苯醌或四氰基对二次甲基苯醌 中的一种。

步骤(4)中所述的脱蛋白、脱脂肪沉淀剂选自酸性乙腈(pH2)、三氯乙 酸、钨酸钠、醋酸钠或醋酸铅中的一种。其中，使用酸性乙腈或三氯乙酸时 将其与牛奶等体积混合；使用钨酸钠、醋酸钠或醋酸铅时按牛奶重量的2～ 10％重量百分数混合。

同现有技术相比，本发明具有以下优点：