[发明专利]SRY特异性TaqMan探针引物对与实时荧光SRY基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于性别决定基因(Sex-determining region Y，本专利申请文件中简称SRY基因) 检测领域，特别涉及检测SRY基因的TaqMan探针引物对及实时荧光检测试剂盒。

背景技术

性别分化异常是一种常见的遗传病，其发病率约为1％～3％。这类疾病长期困扰着患 者及其亲属，他(她)们无法分辨患者的性别，对患者身心和婚姻等造成严重伤害。人类性别决 定和分化是一个及其复杂的过程，其中SRY基因是性别分化的关键基因。SRY基因在未 分化的性腺中表达以后，大量与睾丸分化相关的转录因子和生长因子基因开始特异性表 达。SRY基因一直被认为是睾丸决定因子的最佳候选基因，在胚胎发育早期的性组织中有 短暂的表达，导致原始性腺组织向睾丸组织分化。SRY基因的缺失或突变是造成性发育异 常的主要原因之一。对性发育异常患者进行SRY基因检测，有利于了解该类患者的遗传学 病因，为其诊断和治疗提供科学依据。

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，本专利申请文件中简称PCR)是一种选 择性体外扩增DNA或cDNA的技术，为最常用的分子生物学技术之一。它包括三个基本步 骤：(1)变性：加热模板DNA，使其解离成为单链；(2)退火：使人工合成的一对寡聚 核苷酸引物在较低温度条件下(常为37-60℃)与模板DNA上需扩增目的序列结合；(3) 延伸：在适宜温度下(一般为72℃)，Taq DNA聚合酶以dNTP为原料使引物端向前延伸， 合成与一条与模板碱基序列完全互补的DNA新链。由这三个基本步骤组成一轮循环，理论 上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍，新合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，使 体系中目的片段呈指数迅速增长，将目的基因或某一DNA片段于数小时内体外扩增至百万 倍、千万倍。因此，PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。

实时荧光PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监 测整个PCR进程。该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与PCR相比，它特异 性更强，由引物和探针双重保证，非特异性双链DNA不会产生荧光信号、灵敏度更高、能 实现多重反应，具有自动化程度高、有效解决PCR污染、实时性和准确性的优势。

目前检测SRY基因一般采用PCR技术，其观察结果主要为凝胶电泳成像法，耗时、耗 力、灵敏度低且易污染。在现有技术中，尚未见应用实时荧光PCR技术检测SRY基因的报 道，也未见实时荧光PCR技术中涉及的SRY特异性TaqMan探针引物对及试剂盒的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供SRY特异性TaqMan探针引物对和实时荧 光SRY基因检测试剂盒，以提高SRY基因检测的准确性和效率，并有效解决PCR的污染问 题。

本发明所述SRY特异性TaqMan探针引物对，由第一引物对、第一探针、第二引物对 和第二探针组成；所述第一引物对由正向引物和反向引物组成，第一引物对中的正向引物 的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所示，第一引物对中的反向引物的核苷酸序列为 序列表中SEQ ID NO：2所示，第一探针的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：3所示； 所述第二引物对由正向引物和反向引物组成，第二引物对中的正向引物的核苷酸序列为序 列表中SEQ ID NO：4所示，第二引物对中的反向引物的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：5所示，第二探针的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：6所示。