[发明专利]蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体及其获得方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，涉及蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性突变体及其获得方法，具体地说，本发明涉及蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的结构及其制备方法，以及作为镇痛药物在医药领域中的应用。

背景技术

蝎作为传统中药已有2000多年的药用历史，又称全虫，全蝎，在“诗经”、“本草纲目”等医学著作中对其药用性即进行了系统描述，是我国的传统名贵中药，具有祛风镇惊，通络止痛等功能。用于偏、正头痛，神经痛，躯身锐痛等，具有较大的开发价值。近年来人们已经发现了多种具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗癫痫等药理作用的蝎毒单组分多肽。天然蝎毒产量极低，因此，采用基因工程方法，用简单的原核或真核生物表达宿主生产具有药用价值的活性蝎毒多肽的方法显得尤为重要。

疼痛是人类共有而又有较大个体差异性的一种不愉快的主观感觉，它在躯体受到威胁时提供警报信号，是生命不可缺少的一种保护机制。专利名称为蝎镇痛抗菌活性肽及其获得方法(申请号：20071010058)的发明提供了一种具有较好镇痛效果的蝎镇痛抗菌活性肽及其获得方法，而要得到镇痛活性提高的系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物及其获得方法却有待于进一步研究。

发明内容

本发明的目的是针对蝎镇痛抗菌活性肽的镇痛活性，利用基因工程技术获得一系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物，通过获得表达产物的实验动物体内镇痛活性，以获得可以进一步开发镇痛类药物的蝎镇痛抗菌活性肽系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物，本发明所述的镇痛系列突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的获得方法常规、简单、产量高，不仅具有重要的指导意义和实用价值，也为工业化生产奠定了基础。

本发明是通过如下技术方案实现的，即分别在蝎镇痛抗菌活性肽第八位(K)、第九位(Y)和第五十八位(N)进行相应的小R侧链氨基酸、F和酸性侧链氨基酸的替代以及上述三个突变位点进行组合替代。

本发明的另一个目的是提供生产上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的方法，该方法包括：

(1)将系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物编码DNA重组至表达载体；

(2)用步骤(1)的重组表达载体转化适当的宿主细胞(原核或真核细胞)；

(3)在适合的诱导表达条件下，培养步骤(2)的被转化的宿主细胞；

(4)收获并纯化所得到的蛋白质。

本发明的再一个目的是提供含有如上限定的蛋白质及一种或多种医药上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。

本发明的再一个目的是提供如上限定的蛋白质在生产镇痛药物中的应用。

本发明提供上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的表达产物分离纯化方法。可使用盐析沉淀、超滤、离子交换层析、疏水作用层析和凝胶过滤等方法从细胞的溶胞产物及培养液中分离并纯化所需的表达产物。在表达产物的分离和纯化过程中，可使用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、酶联免疫吸附法(ELISA)或蛋白免疫印迹法(WESTERN)检测表达产物的存在及相应分子大小。

本发明还提供了上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物在生物制药领域的应用，具体地说包括镇痛生物活性。

本发明首次进行上述系列蝎镇痛抗菌活性肽突变体或该系列突变体的部分片段或该系列突变体衍生物、类似物的小鼠体内镇痛生物学活性实验。

本发明进一步涉及含有上述蛋白和至少一种医药上可接受的惰性载体或赋形剂的药物组合物。可按照制药工业领域已知的基本原则和方法制备适于胃肠道外途径给药的药物组合物(如参见Remington’s Pharmaceutical Science，15th.，Mack Publishing Company，1980)。可通过各种给药途径，特别是静脉内、肌肉内、关节内、腹腔内、鼻内、皮内、皮下等胃肠道外途径投用本发明的药物组合物。

可使用本发明的蛋白或含有该蛋白质的药物组合物作为治疗剂，用于治疗特定类型人体的各种疼痛相关疾病。本发明的药物组合物的治疗有效剂量一般应根据疾病的性质、严重程度及对药物的敏感适应性，以及给药途径等诸多因素由临床医生按照个体化原则来确定。