[发明专利]天麻生化指纹图谱分类与品质鉴定技术及其应用

权利要求书

1.一种天麻生化指纹图谱分类与品质鉴定方法，其特征在于该方法包括以下主要步骤和特 征：

(1)新鲜天麻样本的处理：采用传统方法将新鲜天麻样本蒸熟、烘干、研成粉末，过80目 筛子，置80℃干燥箱中干燥1h；

(2)天麻生化成分的萃取：用电子天平精确地称取天麻粉末1g，置三角瓶中，加入70％乙 醇溶液；将三角瓶与索氏萃取器相连，置97℃热水中热回流20min，用JY92-2D型超声波 细胞破碎器处理20min：超声波处理9s，中间停顿2s，振幅功率250w；超声波处理后称 重，用70％乙醇溶液补充损失的重量；重复上述处理过程一次；萃取溶液用滤纸过滤，收 集滤液，浓缩干燥后，用流动相10％乙腈溶液定溶到10ml，用0.45μm滤膜过滤后，置 冰箱中保存备用；

(3)天麻素对照品溶液的制备：用电子天平精确称取80℃干燥1h的天麻素对照品10mg，置 10ml容量瓶中，用10％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤；置冰箱中保 存至检测；

(4)天麻生化成分分离条件的优化筛选：经过比较筛选确定，梯度浓度乙腈溶液：0～1.5min 为纯水，1.6～3.5min为5％乙腈，3.6～8min为10％乙腈分离效果好，能分离出18种成分；

(5)天麻生化成分检测条件的优化筛选：经过比较筛选确定，219nm波长检测天麻样本能得 到最大天麻素峰面积，检测波长减少或增加都会使天麻素峰面积减少，219nm波长是检测 天麻素的最佳波长；

(6)天麻样本的生化指纹图谱测定与分析：采用优化参数梯度浓度乙腈溶液：0～1.5min为 纯水、1.6～3.5min为5％乙腈、3.6～8min为10％乙腈，219nm波长，Agilent 1100高效液 相色谱仪，EclipseXDB-C₈、4.6×150mm、5μm色谱柱和选定的基本色谱条件：柱温25 ℃、流速1ml/min、进样量20μl测定天麻标准品和其他天麻样本的生化指纹图谱；比较分 析生化指纹图谱发现：来自同一地区或不同地区的同种天麻具有十分相似的生化指纹图 谱；来自不同地方的异种天麻具有不同形状的生化指纹图谱和不同数量的分离峰，但所有 天麻样本都具有8个共有特征峰，分别位于1.28、2.70、4.88、5.44、5.83、6.37、6.60和 7.09min；其中5.44min为天麻素峰；

(7)天麻的有效成分天麻素含量的测定技术和评价：天麻样本的天麻素含量根据天麻样本的 天麻素峰面积，采用下列发明公式计算；

YYH=YYM×YDZHDM×YZ,]]>

公式中的YYH为单位重量样本的有效成分含量，YZ为样本的被测重量，YYM为样本有 效成分峰面积，YDZ为有效成分对照品的被测重量，HDM为有效成分对照品的峰面积； 天麻素是天麻主要有效成分，天麻样本含天麻素越高，其质量越好。