[发明专利]一种芍药组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养技术，具体地说，涉及一种芍药组织培养方法。

背景技术

芍药(Paeonia lactiflora)为芍药科芍药属多年生草本植物，是我国的传统名花，有悠久的栽培观赏历史，自古与“花王”牡丹相伴被称为“花相”。芍药的传统繁殖方式有分株、播种、扦插和压条等，其中分株繁殖法应用最广，也有利于保持品种原有的优良性状，但是该法繁殖系数小，无法满足产业化生产的要求。随着市场的开放，芍药优良的观赏特性和切花品质受到世界瞩目，欧美地区每年对芍药的需求量很大，但是我国芍药种苗的生产形势远不能满足国际花卉市场的需求。

组织培养技术已广泛应用到园林植物繁殖上，但在观赏芍药繁殖上应用的还很少。以组织培养技术对芍药进行离体快繁不仅能提高其繁殖系数，也能缩短其育种年限，对芍药的生产具有重要的意义。CN200510039010.7公开了一种芍药离体组织培养方法，具体描述了从取材消毒到继代的过程，没有对生根及组培苗移栽成活做进一步的研究。目前，芍药属植物的离体快繁研究多集中在牡丹上，有关芍药组织培养的国内外研究较少，已有的关于芍药组织培养技术，仅讨论了无菌体系的建立，还没有形成一整套利用芍药地下芽快速繁殖的方法，也没有涉及到芍药组培苗的生根和移栽，不能为生产提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、成本低廉且适于多种观赏芍药快速繁殖的芍药组织培养方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种芍药组织培养方法，其包括芍药茎尖的灭菌消毒以及对灭菌消毒后的芍药茎尖进行初代培养、继代培养和生根培养的步骤。

前述的组培方法，其中所述的芍药茎尖取材自芍药休眠期的地下芽。

前述的组培方法，其中所述的芍药茎尖的灭菌消毒使用酒精和84消毒液。

前述的组培方法，其中所述的药茎尖的灭菌消毒分两步进行：1)将带有鳞片的芽用浓度为70％～75％的酒精浸泡30～60秒后，用无菌水冲洗，然后用经过稀释的84消毒液浸泡12～15分钟，其中84消毒液与水按1∶3～4的体积比进行稀释；2)剥去芽鳞，露出茎尖，用经过稀释的84消毒液浸泡12～15分钟，其中84消毒液与水按1∶5～7的体积比进行稀释，然后用无菌水冲洗。

前述的组培方法，其中初代培养的培养基为1/2MS+0.1mg/L～1mg/L GA₃+0.2mg/L～1mg/L 6-BA、1/2MS+0.1mg/L～1mg/LGA₃+1mg/L6-BA+0.1mg/L～0.5mg/L NAA，优选1/2MS+1mg/LGA₃+1mg/L 6-BA；继代培养的培养基为1/2MS+0.5mg/L～1mg/L6-BA、1/2MS+0.1mg/L～0.2mg/L TDZ、1/2MS+0.1mg/L～0.2mg/L6-BA，优选1/2MS+0.2mg/L 6-BA；生根培养的培养基为WPM、WPM+0.1mg/L～0.5mg/L IBA、WPM+0.5mg/L～1.0mg/L IBA、WPM+1.0mg/L～2.0mg/L IBA、WPM+0.5mg/L～1.0mg/L NAA。

前述的组培方法，其中继代培养的次数为4～5次。

前述的组培方法，其中生根培养分三步进行：1)将继代培养得到组培苗在3～6℃冷藏8～10天，转接到含NAA的生根培养基上培养15～20天，其中含NAA的生根培养基优选WPM+1.0mg/L NAA；2)将组培苗转接到WPM+2％AC培养基上继续培养20～30天，生根后进行炼苗；3)将生根苗移栽到珍珠岩基质中。

借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

(1)本发明通过对芍药茎尖的灭菌消毒、初代培养、继代培养和生根培养，得到完整的芍药组培苗植株，生根率最高达到26.7％，并能实现出瓶移栽。

(2)采用茎尖进行离体培养产生的组培苗能够保持原品种的优良性状，为良种繁育和产业化生产奠定基础。

(3)本发明的芍药组织培养方法，操作简单、成本低廉，适于多数观赏芍药的快速繁殖。

(4)对外植体表面进行灭菌消毒时，仅使用了酒精和84消毒液，对环境友好。

(5)分两步对外植体表面灭菌消毒，保证了消毒彻底且消毒液不对外植体造成伤害，茎尖成活率达25％以上。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例

1.材料与方法

于10月份取大田中3～4年生的芍药品种‘种生粉’的地下芽作为外植体，放入4℃冰箱冷藏保存4周后接种。