[发明专利]用于冠心病诊断的血管过氧化物酶ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种VPO1融合蛋白，其特征在于通过以下制备方法获得：以含VPO1基因的质粒为模板，根据原核表达载体pEGX-4T-2的GST阅读框架设计引物，使VPO1基因的编码区阅读框与GST的阅读框架一致，并使引物带有SalI和NotI酶切位点，进行PCR扩增，切胶后，经凝胶回收线性的4.9kb的VPO1编码区片段；用所述PCR回收产物及pEGX-4T-2载体进行SalI和NotI双酶切，产生匹配的粘末端，之后将pEGX-4T-2载体与VPO1基因连接，构建成符合阅读框的GST-VPO1融合基因；用含融合基因的pEGX-4T-2-VPO1质粒转化大肠杆菌BL21，挑选阳性菌落，提取纯化获得重组融合蛋白。

2.如权利要求1所述的VPO1融合蛋白，其特征在于：所述引物为：Forward：5’-gatagtcgacatcacctggaacaaggatgg-3’；Reverse：5’-atgcggccgctggctgctagacacgttcac-3’。

3.一种抗人VPO1多克隆抗体，其特征在于：以权利要求1或2所述的VPO1融合蛋白免疫温血动物后，制备的多克隆抗体。

4.如权利要求3所述的抗人VPO1多克隆抗体，其特征在于：所述温血动物为新西兰白兔。

5.一种血管过氧化物酶ELISA试剂盒，包括样品稀释液、酶底物显色液、浓缩洗涤液、封闭液和终止反应液，其特征在于还包括如权利要求1或2所述的VPO1融合蛋白、权利要求3或4所述的抗人VPO1抗体包被的酶标板，以及酶标记二抗。

6.如权利要求5所述的ELISA试剂盒，其特征在于由以下试剂组成：VPO1标准品：浓度为1000ng/ml的VPO1融合蛋白；抗人VPO1多克隆抗体；碱性磷酸酶标记二抗；显色液：4-硝基基磷酸二钠盐；样品稀释液：100mmol/LpH9.6的碳酸盐缓冲液中含有3.03g Na₂CO₃，6.0g NaHCO₃；浓缩洗涤液100mmol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含有1.16g Na₂HPO₄，0.1g KCl，0.1gK₃PO₄，4.0g NaCl；封闭液：100mmol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含有1％BSA，0.5％Tween-20；终止反应液：1.0mol/L的H₂SO₄。

7.权利要求1或2所述的VPO1融合在冠心病诊断中的应用。

8.权利要求3或4所述的抗人VPO1多克隆抗体在冠心病诊断中的应用。

9.权利要求5或6所述的血管过氧化物酶ELISA试剂盒在冠心病诊断中的应用。