[发明专利]一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法

权利要求书

1.一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其主要特征在于：中药黄芪匀浆萃取后 经混合酶生物转化以增加目标化合物黄芪甲苷的含量，固形物使用70～80％乙醇负压空化 提取1～3次，酶解液和提取液合并减压浓缩至干后，加入蒸馏水溶解，用氨水调节pH值 为8～9，水解转化12～24h，所得水解液经正丁醇液液萃取后，采用大孔吸附树脂富集和 一次正相硅胶中压柱层析得到黄芪甲苷的产品，经过低温析晶和重结晶得到纯度大于95％ 的纯品。

2.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：匀 浆萃取-混合酶诱导生物转化技术是在匀浆机械胁迫萃取和混合酶的生物转化的双重作用 下提高黄芪甲苷的含量，匀浆萃取所用的溶剂为配制好的酶溶液，按固液比1∶10～20(g∶mL) 混合，连续萃取1～3次，每次0.5～2min，将匀浆液放入恒温摇床中，在25～40℃酶解12～24 h，转速120～150rpm，所用的混合酶为纤维素酶、果胶酶和β-葡萄糖苷酶以任意比例混 合。

3.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：所 述的负压空化混旋提取技术是以负压为动力，利用气泡产生的空化效应、湍流效应而产生 的高速传质进行液固提取，固形物加入70～80％乙醇溶液，压力为0.04～0.06Mpa，固液比 为1∶10～20(g∶mL)，室温提取1～3次，每次30～90min。

4.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：所 述的皂苷衍生物水解转化技术是利用其它类型的黄芪皂苷在碱性条件下发生脱乙酰化反 应转化为黄芪甲苷，将抽滤后的酶解液和提取液合并，减压浓缩至干后用水溶解，用氨水 调节pH值为8～9，水解转化12～24h。

5.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：正 丁醇液液萃取技术是将得到的水解液，以体积比1∶1～1∶3的正丁醇为萃取溶剂，萃取3～5 次，减压浓缩至干得到固形物。

6.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：大 孔吸附树脂富集技术中大孔吸附树脂采用湿法装柱，保留液面，将液液萃取所得到的固形 物用蒸馏水溶解后，通过大孔吸附树脂柱进行吸附，上样量为0.5～1BV，流速为0.5～1 BV/h，吸附后用10～40％乙醇3～5BV洗杂质，然后用50～60％乙醇10～15BV解吸，收集 解吸液，浓缩至干，所得固形物为粗目标产物，所用树脂包括D101、AB-8、AL-1、AL-2、 ADS-5、ADS-8、ADS-17、ADS-31、D3520、HPD100、HPD500或HPD826广谱性大孔 吸附树脂以及SA-1、SA-2或SA-3皂苷类大孔吸附树脂。

7.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：所 述正相硅胶中压柱层析技术，所用样品为树脂富集后所得粗目标产物，所用硅胶为 300～400目，预先称取质量为样品量的5～10倍的硅胶，采用湿法装柱，所用溶剂包括三 氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇，将样品用少量有机溶剂溶解，加入与浸膏质量比为1∶1.2(w/w) 的层析硅胶拌匀，甲醇溶解后在水浴锅上炒样至干，装入预先装好的硅胶柱中，先后以 10～20BV乙酸乙酯、乙酸乙酯∶甲醇、甲醇连续中压洗脱，收集洗脱液，每份1/40～1/20BV， 用硅胶薄层层析检测洗脱液成分，合并相同部分，展开剂为乙酸乙酯或三氯甲烷∶甲醇 ＝20∶1～1∶1，用10％硫酸染色后烤板，正相硅胶中压柱流动相包括乙酸乙酯∶甲醇的不同比 例梯度。

8.按照权利要求1所述的一种从黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，其特征在于：重 结晶技术所用的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷和甲醇，重结晶所用溶剂比例为乙 酸乙酯、二氯甲烷或三氯甲烷∶甲醇＝20∶1～1∶1，低温析晶温度为-10～25℃。