[发明专利]化学法-酶法制备1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸的方法无效
| 申请号： | 201010100974.9 | 申请日： | 2010-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN101775421A | 公开（公告）日： | 2010-07-14 |
| 发明（设计）人： | 高文运;田洁;廖娟;李恒;王学娇;戴少波 | 申请（专利权）人： | 西北大学 |
| 主分类号： | C12P19/02 | 分类号： | C12P19/02 |
| 代理公司： | 西安智邦专利商标代理有限公司 61211 | 代理人： | 徐平 |
| 地址： | 710069陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 化学 法制 脱氧 木酮糖 磷酸 方法 | ||
1.化学法-酶法制备1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸的方法，其特征在于，该方 法包括以下步骤
取148mg Na2HPO4于15mL离心管中，加入800μl超纯水使之溶解，再 加入0.5mmol rac-缩水甘油或0.25mmol R-缩水甘油，100℃水浴， 反应3h；反应结束后，待离心管冷却至室温后，调pH至7.5，加入过氧 化氢酶 180units，L-甘油磷酸氧化酶 3units，丙酮酸钠55mg，磷 酸三糖异构化酶25units，辅羧酶2mM，MgCl2 10mM，β-巯基乙醇 5m M，1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶500μg，总反应体积为1mL，37℃反 应12小时；反应过程中，用纸色谱法检测反应进行的程度，介质为实 验室常用定性滤纸，展开剂为1M乙酸铵︰99%乙醇︰EDTA-Na2=70︰30 ︰1（v/v/v），显色剂为10%的硫酸乙二胺盐水溶液；反应完成后，4 ℃下阴离子交换剂纯化产物1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸，流动相为0.05- 0.65M甲酸铵溶液，pH8.0，流速2.5mL/min，低浓度到高浓度线性梯度 洗脱，纸色谱检测；将含有1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸部分合并后用阳离 子交换剂脱盐，收集洗脱液减压浓缩得到油状物质，即得1-脱氧-D-木 酮糖5-磷酸产品，低温保存；
所述阴离子交换剂采用DEAE Sephadex A-25，阳离子交换剂采用H型 的Dowex 50w×8 树脂。
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