[发明专利]一种可抑制α-葡萄糖苷酶活性泽泻提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备技术领域。

背景技术

根据国际糖尿病联盟报告，目前全球糖尿病人已逾1亿，预测2025年将突破3亿，主 体为2型糖尿病。糖尿病前期即葡萄糖调节受损(impaired glucose regulation，IGR)，期中包 括空腹血糖受损(impaired fasting glucose，IFG)和葡萄糖耐量受损(impaired glucose tolerance， IGT)。对于IGT和2型糖尿病早期患者，均表现为餐后高血糖，而餐后高血糖对机体的危害 远远超过空腹高血糖。餐后高血糖不仅极易诱发大血管、微血管、周围神经等组织的病变， 引起各种并发症，而且其与冠心病和糖尿病的总死亡率之间的相关性大于空腹高血糖，所以 降低餐后血糖是预防2型糖尿病的发生，减少其并发症和降低死亡率的重要措施之一。

α-葡萄糖苷酶是一种能使不被吸收的复合碳水化合物分解成小肠可吸收的单糖的酶，而 α-葡萄糖苷酶活性抑制剂则通过抑制该酶作用以减少餐后血糖升高，主要代表药物有阿卡波 糖(Acarbose)和伏格列波糖(Voglibose)，前者是通过竞争性和可逆性抑制小肠粘膜刷状缘 α-葡萄糖苷酶，阻断淀粉及蔗糖的裂解，从而延长葡萄糖和果糖在消化道的吸收速度，降低 餐后血糖；后者为选择性双糖水解酶抑制剂，适当延缓糖的吸收，改善餐后血糖，对肠道的 麦芽糖酶和蔗糖酶抑制作用比葡萄糖苷酶抑制剂作用强。它们有腹部不适、胀气、排气等不 良反应。因此，另辟新径，寻找α-葡萄糖苷酶的安全有效的抑制剂，对于治疗、预防非胰岛 素依赖型糖尿病、肥胖症、高脂血症和高脂蛋白血症具有重要的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于以中药泽泻为原料，通过简单实用的工艺处理，得到可抑制α-葡萄糖 苷酶活性的提取物，利用该提取物再加入药物载体制备α-葡萄糖苷酶抑制剂剂型。

本发明的技术方案是：

采用浸提法从中药泽泻中提取得到粗提取物，再将泽泻粗提取物依次用石油醚、醋酸乙 酯、正丁醇萃取，分别获得石油醚部分、醋酸乙酯部分和正丁醇部分，正丁醇部分合并，减 压蒸馏浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。

本发明技术方案是通过以下工艺步骤实现的：

(1)粉碎：将干燥泽泻颗粒粉碎至5～80目；

(2)粗提取：用水或水溶性有机溶剂浸提泽泻，得到提取液，过滤，浓缩至小体积， 冷却，加乙醇于浓缩液中，静置冷藏，分取上层清液，下层料渣离心，所得清液与上层清液 合并，浓缩，得到泽泻粗提取液；

(3)萃取精提：将泽泻粗提取液置于分液漏斗中，然后加入等体积的萃取剂，所用萃 取剂依次为：石油醚、醋酸乙酯、正丁醇，将萃取剂为正丁醇萃取的有机层合并，减压蒸馏 浓缩，干燥后即得到泽泻提取物。

在上述步骤(2)中，泽泻浸提包括震荡法浸提或回流法浸提，提取时间为0.5～7小时， 可提取3次；所用水溶性有机溶剂包括：浓度为100％以下的含1～6个碳原子的醇、烷或酯的 水溶液，其加入量为泽泻颗粒的2～10倍；浓缩液中加入乙醇终浓度为30～90％；静置冷藏温 度为3～10℃，冷藏时间为12～48小时。

泽泻提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性作用的测定：

(1)酶活力测定试剂的配制

67mmol/L磷酸盐缓冲溶液(PH＝6.8)：将磷酸氢二钾7.646g，磷酸二氢钾4.559g混合溶 解于蒸馏水中，定容至500mL。

4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)溶液：将0.091g PNPG溶解于1mL二甲基亚砜，加入 1.6mL磷酸钾缓冲液，配成0.116mol/L底物溶液。

α-葡萄糖苷酶溶液：称3.5mg固体酶，加入67mmol/L磷酸钾缓冲液200μL，配成0.1U/μL 酶溶液。

Na₂CO₃溶液：称取0.53g Na₂CO₃用蒸馏水定容至50mL，配成0.1mol/L的溶液。

还原型谷胱甘肽：10mg还原型谷胱甘肽溶解于10mL磷酸钾缓冲溶液中。

(2)提取物抑制酶活性的测定