[发明专利]巢蛋白部分多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种巢蛋白部分多肽及其应用。

背景技术

巢蛋白(Nestin)是中间丝蛋白家族成员，它的结构包括一个极短的N-末端和一个很长的C-末端，这种结构上的特殊性决定了Nestin不能进行自组装，而只能与其它的IF蛋白构成异源二聚体或混合多聚物。Nestin基因的转录调控同样具有独特性。Nestin基因内有3个内含子，结构具有一般中间丝的特征。转基因研究显示，Nestin基因的第1、2内含子中有两个独立的细胞型特异调节因子，分别指导发育中的肌细胞和神经前体细胞报告基因的表达。调控中枢神经系统(CNS)内神经前体细胞表达Nestin的增强子又有两个：一个位于第2内含子，是调控胚胎绝大部分神经管的神经前体细胞表达的泛CNS增强子(Pan CNS Hancer)。另一个则是调控胚胎中脑神经前体细胞表达的区域特异性增强子(Region Specificen Hancer)。巢蛋白最初在大鼠中枢神经系统神经前体细胞中被克隆，并作为神经干/祖细胞的特异性标志物而被广泛应用。进一步的研究发现，在哺乳动物胚胎发育过程中，Nestin广泛表达于中枢及外周神经系统、胰腺、肌肉前体细胞、肝卵圆细胞、部分中枢中胚层间质组织等。在成体组织中Nestin表达细胞主要出现在中枢神经系统的侧脑室、嗅球、齿状回等部位以及毛囊、胰腺等特定组织；在机体损伤或某些病理条件下，可观察到部分终末分化的细胞重新表达Nestin并进入增殖、分化和迁移的状态，这说明Nestin阳性细胞可能直接参与了胚胎阶段的大量表达。

目前国内外已有针对鼠源，人源等哺乳动物的Nestin单克隆或多克隆抗体，主要用于哺乳动物Nestin阳性细胞的筛选及神经干/祖细胞的鉴定。但由于针对禽类的Nestin单克隆或多克隆抗体尚没有已公布的专利及商品化产品，这就影响了与之相关研究的发展，因此，开发并研制禽类特异性的Nestin单克隆或多克隆抗体具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种巢蛋白部分多肽及其应用。

本发明所提供的巢蛋白(Nestin)部分多肽，其氨基酸序列为序列表中的序列1。

本发明的巢蛋白(Nestin)部分多肽，可用来制备免疫原，该免疫原免疫动物可获得与Nestin特异结合的多克隆抗体。

对在动物体内产生免疫反应而言，大多数多肽的分子量都太小，将多肽与载体蛋白如匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白等交联之后，不仅能增加抗原的大小，也能增强免疫性。

因此，本发明还提供了一种复合蛋白。

本发明所提供的复合蛋白是所述多肽与载体蛋白偶联形成的复合蛋白。

本发明的复合蛋白中，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

在免疫动物时，为了增强免疫原性通常将复合蛋白与免疫佐剂混合。

本发明所提供的免疫原，是所述复合蛋白和免疫佐剂的混合物。

本发明的与禽源巢蛋白特异结合的多克隆抗体，是用免疫原免疫动物，采取免疫后动物的血液，获得的血清；所述免疫原是复合蛋白和免疫佐剂的混合物；所述复合蛋白是多肽与载体蛋白偶联形成的复合蛋白，所述多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。

本发明的与禽源巢蛋白特异结合的多克隆抗体，其中，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

本发明的免疫原免疫动物获得了较高效价的免疫血清，经ELISA检验效价高于1∶62500，并且免疫印迹法证明该免疫血清与能与禽源神经干/祖细胞或Nestin阳性细胞表面分子特异结合，免疫血清能在细胞水平上检测禽源巢蛋白的表达。

附图说明

图1为免疫印迹法检测免疫血清的特异性。

图2为空白对照组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为FITC荧光图片，B为PI荧光染色图片，C为相差图片，标尺为50μm。

图3为对照血清组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为FITC荧光图片，B为PI荧光染色图片，C为相差图片，标尺为50μm。。

图4为免疫血清组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为FITC荧光图片，B为PI荧光染色图片，C为相差图片，标尺为50μm。

具体实施方式

实施例1、与禽类的巢蛋白特异结合的多克隆抗体

(一)合成免疫原

人工合成免疫多肽，其氨基酸序列为CGEEDVQDGDNPPATETS。

人工合成对照多肽，其氨基酸序列为LDQELASFSQSLEGFRC。

对人工合成的多肽进行检测。