[发明专利]基于环介导等温扩增技术的空肠弯曲杆菌快速检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测试剂，具体涉及用于环介导等温扩增技术检测样品空肠弯曲杆菌的检测试剂盒其使用方法。

背景技术

空肠弯曲杆菌是弯曲杆菌属成员之一，属革兰氏阴性菌，是近年来国内外广泛重视的人畜共患病原菌，主要引起人类发热、急性肠炎、急性感染性多发性神经根神经病，即格林巴利综合征。该菌可以通过带菌动物或患者的粪便进入环境中，并在水环境中进入一种称为“活的非可培养(viable but noncultureable，VBNC)状态的休眠期，处于VBNC状态的细菌在特定条件下可以复苏，且具有致病性。接触带菌动物，或摄入受到污染的禽制品、水源和牛奶是该菌感染人体的主要途径。

由于空肠弯曲杆菌培养条件苛刻，在25℃不生长，42℃生长良好，但容易进入VBNC状态，使得常规的分离培养和生化鉴定耗时费力、灵敏度不高，所需时间藏，而不利于爆发疫情时的快速诊断，也不符合临床病原菌检测所要求的快速、准确的原则。因此，建立一种快速、简、可靠的检测方法十分必要。

环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplication，LAMP)是Notomi等在2000年开发的一种新颖的恒温核酸扩增方法，其原理是针对目的基因的6个区域设计4条特异性引物，利用一种链置换DNA聚合酶(Bst DNApolymerase)在等温65℃左右，几十分钟，即可实现核酸的高效扩增。4条引物对靶序列的6个特异序列区域的识别，保证了LAMP扩增的高度特异性。LAMP不需要模板的热变性，长时间温度循环，在等温条件下扩增，不会因温度改变而造成时间的浪费。有无肉眼可见的焦磷酸镁的白色沉淀，成为判断核酸是否扩增的最简单的方法。环介导等温扩增技术在病原核酸检测技术上具有很多优点，但是目前还未见有应用环介导等温扩增技术检测空肠弯曲杆菌的方法和检测试剂盒。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种环介导等温扩增技术(Loop-mediatedisothermal amplicatio of DNA，简称LAMP)的空肠弯曲杆菌快速检测试剂盒，可广泛用于食品、兽医等领域。

为了实现上述目的，本发明采用以下的技术方案：

本发明由(1)反应液；(2)引物组；(3)样品预处理液；(4)阳性对照液组成，所述引物组可由下述八套引物组中的任一引物组组成，每套引物组包括二对特异性引物即内引物、外引物组成，分别如下：

引物序列如下：

引物组一：

内引物1：

TGTGCCTACTTTTATATTCTCATCTTTTTCCTCAATCTCGCTTTGGGA

内引物2：

CACGGAAAAAGTATCAATTCTGAATTTTGCCTAAGATGACATTTCTATCAACA

外引物1：ACAAAATTTCAGCCTTTGGT

外引物2：CCTTGAGCACGTTCTTTG

或引物组二：

内引物1：

TCCGTGTGTGCCTACTTTTATTTTATTCACGATGTTTTAGGGATTAACG

内引物2：

TGTTGATAGAAATGTCATCTTAGGCTTTTCGACAAGTGCATTATCGAGTA

外引物1：CAGCCTTTGGTCCTCAA

外引物2：TTTGCGCTGCTTTGGTT

或引物组三：

内引物1：

TGTGCCTACTTTTATATTCTCATCTTTTTGCTTTGGGATTATTCACGAT

内引物2：

CACGGAAAAAGTATCAATTCTGAATTTTGCCTAAGATGACATTTCTATCAACA

外引物1：CAGCCTTTGGTCCTCAA

外引物2：CATTATCGAGTATGCCTTGAG

或引物组四：

内引物1：

CGGTCGATTTTGTTCCAAATTATGATTTTAACCCTAGAAGGTAAAACATCAG

内引物2：

TGCTTCAGTATAACGCATCGCTTTTACAAGGCAACTTTGGATCT

外引物1：AGCTATACCACTTGAACCATT

外引物2：CTATGAGATATCCAAGTATTACAGG

或引物组五：

内引物1：