[发明专利]表达胞内多核苷酸结合蛋白的载体作为佐剂的用途

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求基于Ljunberg、Lladser、和Kiessling的共同悬而未决的美国临时专利申请，流水号61/212,554，提交日2009年4月13日的关于USE OF VECTORS EXPRESSING INTRACELLULAR POLYNUCLEOTIDE BINDING PROTEINS AS ADJUVANTS的优先权。

技术领域

一般而言，本发明涉及疫苗组合物和方法，且更具体而言，涉及包含疫苗抗原和激活剂的疫苗组合物。

发明背景

遗传疫苗接种诱导依靠细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和/或抗体的形成在小动物模型中能够针对病毒考验提供保护和肿瘤排斥的免疫应答[Holmgren等2006，Lindencrona等2004，Robinson等1993，Ulmer等1993，Vertuani等2004]。然而，DNA疫苗迄今尚未能在临床试验中引发强力的免疫应答。

另外，癌症的主动免疫疗法的开发已经受到针对弱的、肿瘤相关的自身抗原的破坏性耐受的困难阻碍。因此，有效的投递和佐剂是人类中成功的DNA免疫需要的。

对皮肤的DNA疫苗接种是一种对于临床应用有吸引力的办法，因为皮肤是容易地可进入的，而且具有大量的抗原呈递细胞，例如朗格汉斯细胞。体内皮内DNA电穿孔容许促进高抗原表达的有效的质粒摄取，而且诱导较高水平的特定T细胞，如此提高DNA疫苗接种的功效[Roos等2006]。Roos描述了电穿孔增强对癌症疫苗的免疫应答的用途。Roos还描述了一种称作的特殊脉冲方案，其增强对癌症疫苗抗原的细胞免疫力。会期望具有会进一步加强免疫应答的佐剂。

已经采用数种重组的和质粒编码的细胞因子诸如IL-2、GM-CSF、IL-12和IL-15作为分子佐剂[Barouch等2000，Rollman等2004，Sin等1999]。这些细胞因子可以如下起作用，即在疫苗接种部位中提高炎性应答，如此将免疫细胞募集至疫苗接种的部位，并促进专门的抗原呈递细胞诸如树突细胞(DC)的成熟。单一细胞因子可以具有免疫调控效果；IL-12是Th1型应答的一种强促进剂，而IL-15促成记忆CD8+T细胞的诱导[Kutzler等2005]。

蛋白质形式的重组细胞因子具有有限的体内寿命。由于这点，细胞因子在细胞中表达抗原的大量时间期间不同时存在。会期望具有与细胞因子同时表达，使得其免疫增强效果可以在存在抗原的大量时间存在的分子佐剂。

具有质粒编码的抗原的DNA疫苗混合物中投递的质粒编码的细胞因子具有同时表达的潜力。因为此类质粒编码的佐剂会在具有质粒编码的抗原的混合物中稀释，所以剂量被降低，并会降低佐剂的潜在表达。或者，因为使用强的组成性启动子来自质粒表达细胞因子，所以细胞因子的过表达是有可能的。一种在同时调控最大响应的情况中诱导细胞因子生成的手段会是期望的。

细胞因子一致地起作用，并且会期望靶向单一细胞因子基因的转录起始上游的信号传导途径。这可以通过激活样式识别受体(PRR)，即为了检测由多种病原体共享的共同结构而设计的多样的进化保守受体的组，诸如Toll样受体(TLR)来实现。已经使用来自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的细菌TLR5配体鞭毛蛋白来加强遗传疫苗，并在接种疫苗的小鼠中针对致死性流感考验赋予保护[Applequist等2005]。另外，已经在许多研究(包括具有有希望的结果的临床试验)中使用由TLR9识别的含有低甲基化CpG的细菌DNA[Krieg等1995，Davis等1998，Hemmi等2000，Cooper等2004]。这些Toll样受体之每种是存在于一些细胞诸如髓样谱系细胞的细胞表面上的受体。会期望利用能结合胞质DNA，诸如投递入细胞中以进行DNA疫苗接种的胞质DNA的受体。

美国专利6239116和6406705分别描述了使用含有未甲基化CpG二核苷酸的寡核苷酸(TLR9结合配体)作为单独的佐剂或与其它非核酸佐剂一起的佐剂。没有描述表达多核苷酸的胞内受体的载体作为佐剂的用途。

TLR配体作为分子佐剂的用途证实使用其它PRR的配体作为分子佐剂的可能性。已经假定，存在着会识别胞内DNA的PRR。令人感兴趣地，在用质粒DNA转染后，肌细胞上调I型干扰素的表达，并上调MHC I类和共刺激分子的表达。此外，它们可以以TLR9不依赖性，但干扰素应答因子3(IRF3)依赖性方式激活抗原特异性CD8+T细胞[Shirota等2007]。