[发明专利]从植物细胞培养物中生产和抽提原花青素

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2009年4月3日提交的美国临时申请号61/166,591的权益，该申请在此以其整体引入作为参考。

技术领域

本发明涉及用于发展可可组织细胞培养物的方法。本发明还涉及选择生产高水平原花青素的细胞系及从细胞培养物中抽提同样物质以生产食品配料、食品添加剂、治疗组合物、或化妆品组合物的方法。本发明还涉及新培养基，如用于生长可可细胞的细胞悬浮培养物的液体培养基及用于提高此悬浮细胞的原花青素生产的液体培养基组合物。

背景技术

多酚广泛分布于植物、水果和蔬菜中，并且因其在人类和动物健康中的生理功能(包括抗氧化、抗突变和预防癌症的活性)受到了相当的重视(Salvia等，J.Agric.Food Chem.39：1549-1552，1991；Bomser等，Cancer Lett.，135：151-157，1999；Zhao等，Carcinogenesis，20：1737-1745，1999)。流行病学研究曾暗示了多酚中的黄酮类化合物可以降低心脏病的风险(Hertog等，Lancet：342：1007-1011，1993)。此外，已有结果显示膳食黄烷-3-醇和/或原花青素在实验动物中降低了动脉粥样硬化和冠心病的发病率(Tijburg等，Atherosclorosis，135：37-47，1997；Yamakoshi等，Atherosclerosis，142：139-149，1999)。负责这些效果的机制之一涉及到它们对于低密度脂蛋白(LDL)氧化的抑制作用(Steinberg，Circulation，85：2337-2344，1992)。

已知可可植物(可可属可可Theobroma cacao L.，梧桐科)的种子富含多酚(Porter等，Phytochemistry，30：1657-1663，1991)。制备自发酵和烘烤可可豆的可可酒的某些抗氧化组分(可可和巧克力产品的主要成分)已被鉴定为黄烷-3-醇和原花青素寡聚体(Sanbongi等，J.Agric.Food Chem.，46：454-457，1998；Adamson 等，J.Agric.Food Chem.，47：4184-4188，1999)。

可可属的其他种和如Herrania的其他属也是可可原花青素的已知的来源。可可属的二十个不同种已有所描述，但通常只有十二种被接受。在这些种中，九个原产于亚马逊河流域，因此遗传分布的中心似乎是该区域的西半部(Giacometti，1994，In“Neglected Crops：1492 from a different perspective(J.E.Hemando Bermejo和J.Leon，编)Plant Production and Protection Series No.26，FAO，Rome，Italy，p205-209)。

可可属一般在新热带区，并且分布在北纬18°和南纬15°之间的西半球的热带雨林中。具有最多物种的区域是在哥斯达黎加和东北哥伦比亚之间。人们发现了五派和二十个种。大花可可树(Theobroma grandiflorum)属于由十一个种组成的Glossopetalum(Glossopetalum)派；可可属可可是可可派的唯一种。

可可属的四个种已被描述为可食用肉的生产者：大花可可树、Theobroma canumanense Pires & Froes、Theobroma subincanum Martius、(巴西的Cupuí及哥伦比亚的Cacau de monte)和Theobroma tricolor Humb.& Bonpl，是自西亚马逊河流域至南墨西哥都有分布的小树。巧克力也由这些种的种子制造(Giacometti，1994，In“Neglected Crops：1492 from a different perspective(J.E.Hemando Bermejo和J.Leon，编)Plant Production and Protection Series No.26，FAO，Rome，Italy，p205-209)。已有结果显示可可属与Herrania属的几个种的豆生产类似的原花青素，并且这些化合物能从豆中抽提(Romanczyk等，WO 97/36497)。