[发明专利]用于制备度洛西汀(DULOXETINE)醇之改良生物催化剂

权利要求书

1.一种功能性苯乙醇脱氢酶突变体，其衍生自来自固氮弧菌属物种(Azoarcus sp.)且具有根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的苯乙醇脱氢酶EbN1。

2.一种功能性苯乙醇脱氢酶突变体，其衍生自来自固氮弧菌属物种且具有根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的苯乙醇脱氢酶EbN1，其中该突变体选自说明书中表1所列出的突变体。

3.一种功能性苯乙醇脱氢酶突变体，其衍生自来自固氮弧菌属物种且具有根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列的苯乙醇脱氢酶EbN1，其中该突变体在至少一个选自以下的序列区域中具有至少一个突变：

(1)142至153(环2)及

(2)190至211(螺旋αFG1)。

4.如权利要求2的突变体，其在另一选自以下的序列区域中另外具有至少另一个突变：

(3)93至96(环1)

(4)241至249(C末端)

(5)138至141(结合袋的亲水性区域)及

(6)Cys61和/或Cys 83。

5.如权利要求3及4中任一项的突变体，其中至少一个下列基团得到突变：

T192、L197、M200、F201、L204、M246、L139、T140、T142、L146、I148、Y151、C61、C83、L186，各个氨基酸经任何所需其他天然氨基酸置换。

6.如权利要求1至4中任一项的突变体，其选自包含至少一个下列突变的突变体：

a)单一突变：

Y151X_A，其中X_A＝A、R、N、E、Q、G、H、I、L、M、T或V；

T192X_B，其中X_B＝A、E、G、I、P、S、W、V或L；

b)多点突变：

Y151X_A T192X_B，其中X_A及X_B具有上文给出的含义。

7.如前述任一项权利要求的突变体，其特征在于至少一种下列经修饰的部分序列：

(1)142-TTYWX₁KX₂EAX₃T-153(经修饰的环2)及

(2)190-ATX₄EASAX₅SAX₆X₇DVX₈PNMLQAI-211(经修饰的螺旋αFG1)

其中X₁至X₈彼此独立地为任何所需氨基酸基团，其中基团X₁至X₃及X₄至X₈中的至少一个不为根据SEQ ID NO：2的天然酶的天然氨基酸基团。

8.如权利要求11的突变体，其中

X₁为L或经I、V、A、M、F或H取代

X₂为I或经L、V、A、M、F或H取代

X₃为Y或经A、R、N、E、Q、G、H、I、L、M、T或V取代；

或其中

X₄为T或经A、E、G、I、P、S、W、V或L取代

X₅为L或经I、V、A、M、F或H取代

X₆为M或经Y、W、E、V、S、R、Q、K、I、H、G、F、E或D取代

X₇为F或经G、K、T、Y、M、W或R取代

X₈为L或经I、V、A、M、F或H取代。

9.如如前述任一项权利要求的突变体，其仍具有SEQ ID NO：2的脱氢酶的酶促活性的至少约50％。

10.如前述任一项权利要求的突变体，其具有与SEQ ID NO：2至少约70％的序列同一性百分数。