[发明专利]通过抑制血管内皮生长因子(VEGF)的天然反义转录子治疗VEGF相关的疾病

说明书

交叉引用

本申请要求2008年12月4日提出的美国临时申请61/119,957的优先权，通过引用将该申请整体并入本文。

发明领域

本发明的实施方案包括调节VEGF和相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。

背景

DNA-RNA和RNA-RNA杂交对核酸功能的许多方面(包括DNA复制、转录和翻译)是重要的。杂交对于检测特定核酸或改变其表达的多种技术也很重要。例如，反义核苷酸通过和靶RNA杂交从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制而破坏基因表达。反义DNA还具有DNA-RNA杂交体作为核糖核酸酶H消化(大多数细胞类型中存在的活动)的底物的额外特征。反义分子可以被送入细胞(如在寡脱氧核苷酸(ODN)的例子中)，或者它们可由内源基因表达为RNA分子。FDA最近批准了一种反义药——VITRAVENE^TM(用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，这反映反义有治疗实用性。

概述

本概述用于介绍本发明的概况，以简要指明本发明的实质和内容。它随着下列理解而提出，即不能将它用于解释或限制权利要求的范围或含义。

在一个实施方案中，本发明提供通过使用反义寡核苷酸抑制天然反义转录子作用的方法，所述反义寡核苷酸靶向天然反义转录子的任何区域，导致相应有义基因的上调。本文还预期天然反义转录子的抑制可以通过siRNA、核酶和小分子来实现，这些也被认为在本发明的范围内。

一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织里的VEGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的VEGF多核苷酸的功能和/或表达，其中所述寡核苷酸与包含SEQ ID NO：2的核苷酸1-643或SEQ ID NO：3的核苷酸1-513(图3)内的5-30个连续核苷酸的多核苷酸的反向互补具有至少50％序列同一性。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸靶向VEGF多核苷酸的天然反义序列(例如SEQ ID NO：2和3中展示的核苷酸)，及其任何变体、等位基因、同系物、突变体、衍生物、片段和互补序列。反义寡核苷酸的实例如SEQ ID NO：4-9(图4)所展示。

另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的VEGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的VEGF多核苷酸的功能和/或表达，其中所述寡核苷酸与VEGF多核苷酸的反义的反向互补具有至少50％序列同一性。

另一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中的VEGF多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括：使所述细胞或组织与5-30个核苷酸长度的反义寡核苷酸接触，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中的VEGF多核苷酸的功能和/或表达，其中所述寡核苷酸与VEGF反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50％序列同一性。

在一个优选的实施方案中，组合物包含与有义和/或反义VEGF多核苷酸结合的一种或多种反义寡核苷酸。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个修饰的或取代的核苷酸。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个修饰的键。

在另一个实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的碱基，其包含硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、肽核酸、2’-O-甲基、氟代或碳、亚甲基或其它锁定核酸(LNA)分子。优选修饰的核苷酸是锁定核酸分子，包括α-L-LNA。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸通过皮下、肌内、静脉内或腹膜内给予患者。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸以药物组合物给药。治疗方案包括给予患者至少一次反义化合物；但是，该治疗可改为在一段时间内包括多次给药。该治疗可以结合其它一种或多种类型的疗法。

在另一个优选的实施方案中，寡核苷酸包裹于脂质体内或依附于载体分子(例如胆固醇、TAT肽)。

以下介绍其它方面。

附图简述

图1：