[发明专利]通过在体内递送的胰岛转录因子基因再生胰岛和逆转糖尿病

权利要求书

1.一种用于在胰腺中超声靶向破坏微泡的组合物，所述组合物包含：

预装配的脂质体-核酸微泡复合物，其中所述预装配的脂质体-核酸复合物包含在胰岛素启动子的控制下的NeuroD基因，所述胰岛素启动子包含与胰岛素启动子区可操作地连接的一个或多个胰岛素反应调节基因，所述胰岛素启动子区包含：胰岛素启动子的基因组片段，所述胰岛素启动子的基因组片段包含胰岛素基因的5’非翻译区、外显子1、内含子1和外显子2，其中在胰腺的靶位点微泡的破坏将核酸递送到位于超声破坏位置的胰腺细胞中，其中掺入核酸的细胞对高血糖水平作出反应表达胰岛素。

2.权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含与可调节胰岛素启动子区可操作地连接的一个或多个胰岛素反应调节基因，所述胰岛素启动子区包含来自NeuroD基因的胰岛素起始位点上游的区域上游的50个连续碱基。

3.权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含一个或多个基因，所述基因选自与胰岛素启动子区可操作地连接的一个或多个胰岛素反应调节基因，所述胰岛素反应调节基因选自ngn3、GLP1、PDX1、Mafa、β细胞素、Nkx2.2、Nkx6.1、PAX4、Isl1、细胞周期蛋白D2(和细胞周期蛋白家族的其他成员)、CDK4(和细胞周期蛋白依赖性激酶家族的其他成员)和针对细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的siRNA，例如p16(和INK4家族的其他成员)或p27(和CIP/KIP家族的其他成员)。

4.权利要求1所述的组合物，所述组合物还包含与所述组合物联合给药的药物，其中，所述药物选自抗细胞凋亡剂、抗炎剂、JNK抑制剂、GLP-1、他克莫司、西罗莫司、阿那白滞素、Dervin聚酰胺或它们的组合。

5.一种用于在胰腺中利用超声靶向破坏微泡再生胰腺β细胞的组合物，所述组合物包含：

微泡，所述微泡包含NeuroD，其中，所述微泡包含脂质，所述脂质在胰腺中通过超声破坏释放NeuroD。

6.权利要求5所述的组合物，其中，所述NeuroD为重组NeuroD。

7.权利要求5所述的组合物，其中，所述NeuroD包含在CUBI、RIP2.1、RIP3.1或HIP3.1启动子的控制下的NeuroD基因，并且所述NeuroD在已通过超声靶向破坏微泡进行靶向表达的细胞中表达。

8.一种用于在糖尿病患者的体内和原位再生胰岛素反应细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

递送有效量的Neuro D到胰腺，其中，胰腺中的细胞引起细胞对血液中的高葡萄糖水平作出反应分泌胰岛素。

9.权利要求8所述的方法，其中，胰腺细胞中有效量的NeuroD包含递送表达NeuroD基因的外源核酸片段。

10.权利要求8所述的方法，其中，通过超声靶向破坏微泡将NeuroD递送到胰腺中。

11.权利要求8所述的方法，其中，胰腺细胞中有效量的NeuroD包含递送外源核酸片段，所述外源核酸片段在CUBI、RIP2.1、RIP3.1或HIP3.1启动子控制下表达NeuroD基因。

12.一种使得靶细胞变得对胰岛素反应的方法，所述方法包括：

制备包含NeuroD基因的核酸片段，所述核酸片段包含在胰岛素反应启动子的控制下的NeuroD基因，所述胰岛素反应启动子选自CUBI、RIP2.1、RIP3.1或HIP3.1启动子；

将该核酸片段载入微泡中；

向患者注射微泡；

将核酸片段递送到胰腺细胞中；和

将靶细胞保持在对于表达所述的胰岛素反应调节基因有效的条件下；其中，在靶细胞中NeuroD基因的表达引起细胞对高血糖作出反应。

13.权利要求12所述的方法，所述方法还包括一个或多个基因，所述基因选自在启动子的控制下的PDX1、Nkx2.2、Nkx 6.1、PAX4、MafA、ngn3、GLP1、细胞周期蛋白D2、CDK4和它们的组合。

14.权利要求12所述的方法，所述方法还包括与所述组合物联合给药的药物，其中，所述药物选自抗细胞凋亡剂、抗炎剂、JNK抑制剂、GLP-1、他克莫司、西罗莫司、阿那白滞素、Dervin聚酰胺或它们的组合。