[发明专利]高亲和力T细胞受体及其应用

权利要求书

1.一种核酸分子，其编码识别肿瘤抗原的TCR的V(D)J区并包含编码所述TCR的α-链的核酸序列SEQ ID NO：1和/或编码所述TCR的β-链的核酸序列SEQ ID NO：2，或

其衍生物，其编码所述α-链或β-链，其中所述链已经通过1-15个氨基酸的一个或多个添加或缺失而改变，所述添加或缺失在各链的CDR3区以外，和/或通过1-15个氨基酸的保守置换而改变，其中维持或提高肿瘤抗原识别特征，

或

其片段，其编码识别肿瘤抗原的TCR的CDR3区并具有核酸序列SEQID NO：3或4或编码氨基酸序列SEQ ID NO：5或6，

或

所述片段的衍生物，其中所述CDR3区已经通过总数为1-5个氨基酸，但是不超过1-3个连续氨基酸的一个或多个添加和/或缺失而改变，和/或1-6个氨基酸的保守置换而改变，并且其中维持或提高肿瘤抗原识别特征。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中所述α-链或β-链编码序列的衍生物通过密码子最优化从SEQ ID NO：1和2获得，并包含编码所述TCR的α-链的核酸序列SEQ ID NO：7和/或编码所述TCR的β-链的核酸序列SEQ ID NO：8。

3.前述一项或多项权利要求的核酸分子，其中所述肿瘤抗原是酪氨酸酶。

4.一种TCR，优选可溶性TCR，其由权利要求1-3中一项或多项的核酸编码或包含氨基酸序列SEQ ID NO：5和/或6。

5.一种功能性TCRα和/或β链融合蛋白，包含：

a)至少一个附加表位，和

b)根据权利要求1-4中一项或多项的TCR的α链和/或β链的氨基酸序列，

其中所述附加表位选自

i)添加至所述α-链和/或β-链的N-和/或C-端的附加表位，或添加至α-链和/或β-链序列中，但在CDR3区以外的附加表位，

ii)插入至所述α-链和/或β-链的恒定区中的附加表位，和

iii)替换所述α-链和/或β-链的恒定区中许多氨基酸的附加表位。

6.一种T细胞，其表达权利要求4或5的TCR，或表达包含权利要求1的CDR3区之一的TCR。

7.一种免疫球蛋白分子，抗促成素，TCRγ/δ链，其具有插入的权利要求1的CDR3区。

8.一种载体，优选质粒、穿梭载体、噬菌粒、粘粒、表达载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体或在基因治疗中使用的颗粒和/或载体，其包含一种或多种权利要求1-3之一的核酸或编码根据权利要求4或5的TCR的核酸。

9.一种细胞，优选PBL，其已经使用权利要求8的载体转化。

10.一种药物组合物，其包含权利要求4或5的TCR，权利要求6的T细胞，权利要求7的免疫球蛋白分子，抗促成素，TCRγ/δ链或权利要求9的细胞和药用载体，优选输注剂或注射剂。

11.根据权利要求10的药物组合物用于制备在过继细胞治疗中使用的药物的用途。

12.权利要求11的用途，其中所述药物用于治疗患者，优选HLA-A2阳性患者中的疾病，所述疾病涉及表达酪氨酸酶的恶性细胞，优选为黑素瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、和/或外胚层起源的罕见肿瘤。