[发明专利]用于增强的抗-IGF1R表达的βGl-IgG内含子

权利要求书

1.分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含β-珠蛋白剪接供体位点和γ免疫球蛋白剪接受体位点，其中所述位点间隔约125个核苷酸；所述多核苷酸可操作性连接于启动子，所述位点和启动子可操作性连接于编码抗-IGF1R、抗-IL-23 p19、抗-IL23受体、抗-IL-17、抗-PD1或抗-HGF抗体免疫球蛋白轻链或重链的基因，所述链任选融合于免疫球蛋白恒定区。

2.权利要求1的分离的多核苷酸，其包含β-珠蛋白剪接供体位点和γ免疫球蛋白剪接受体位点，所述β-珠蛋白剪接供体位点包含核苷酸序列CAGGTAAGTTTA (SEQ ID NO: 4)，所述γ免疫球蛋白剪接受体位点包含核苷酸序列TTTCTCTCCACAGGC (SEQ ID NO: 5)，其中所述位点间隔约125个核苷酸。

3.权利要求2的多核苷酸，其中所述剪接供体位点和剪接受体位点由以下序列间隔开：

(SEQ ID NO: 3的核苷酸51-175)。

4.权利要求1的多核苷酸，其中所述启动子是CMV启动子。

5.权利要求1的多核苷酸，其中所述基因编码与κ免疫球蛋白恒定区融合的免疫球蛋白轻链。

6.权利要求1的多核苷酸，其中所述基因编码与γ-1免疫球蛋白恒定区融合的免疫球蛋白重链。

7.权利要求6的多核苷酸，其中所述基因编码包含SEQ ID NO: 6、8-11、18或26的氨基酸20-128或SEQ ID NO 31的轻链免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2 和CDR-L3；或其中所述基因编码包含SEQ ID NO: 7、12、13、14或22的氨基酸20-137或SEQ ID NO: 30的重链免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2 和CDR-H3。

8.权利要求7的多核苷酸，其中所述基因编码SEQ ID NO: 8、9、10或11的氨基酸20-128。

9.权利要求7的多核苷酸，其中所述基因编码SEQ ID NO: 12或13的氨基酸20-137。

10.分离的质粒载体，其包含权利要求1的多核苷酸。

11.分离的质粒载体，其特征在于选自图1-10的图中所示的质粒图。

12.权利要求10的质粒，其包含SEQ ID NO: 3的核苷酸序列的核苷酸39-190。

13.分离的宿主细胞，其包含权利要求1的多核苷酸。

14.权利要求13的宿主细胞，其中所述多核苷酸整合到宿主细胞的染色体DNA中。

15.权利要求14的宿主细胞，其包含两个或更多个拷贝的所述多核苷酸。

16.权利要求13的宿主细胞，其中所述多核苷酸不整合到宿主细胞的染色体DNA中。

17.权利要求16的宿主细胞，其包含两个或更多个拷贝的所述多核苷酸。

18.制备主细胞库的方法，该方法包括将权利要求1的多核苷酸导入宿主细胞，选择包含所述多核苷酸的宿主细胞的单克隆群体，培养所述克隆群体，确定来自所述培养物的细胞是否含有细菌、病毒、真菌和/或支原体，并且，如果都没有检测到，则在冷冻条件下在一个或多个容器中保存来自所述培养物的细胞。

19.权利要求18的方法，其中所述多核苷酸是在质粒中，所述质粒包含图1或2的质粒图。

20.权利要求18的方法，其中所述多核苷酸是在质粒中，所述质粒包含图6、7、8、9或10的质粒图。

21.权利要求18的方法，其中所述细菌、病毒、真菌和/或支原体是选自下组的一个或多个成员：人免疫缺陷病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、人巨细胞病毒、人嗜T淋巴细胞病毒、EB病毒、人单纯疱疹病毒、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌。

22.通过权利要求18的方法生产的主细胞库。

23.制备工作细胞库的方法，该方法包括培养来自权利要求22的主细胞库的细胞，并且在冷冻下在一个或多个容器中保存来自所述培养物的细胞。