[发明专利]脂肪酸乙酯的酶法产生

权利要求书

1.一种产生脂肪酸乙酯的方法，包括：

a)将包含甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、游离脂肪酸或其任意组合的底物与至少一种固定化的脂肪分解酶反应以提供反应混合物，其中酶加载量相对于底物为30％w/w以下，而乙醇对脂肪酸的摩尔比例(EtOH∶FA)为至少3.0当量；

b)从所得的反应混合物分离固定化的脂肪分解酶；和

c)对固定化的脂肪分解酶不经修饰直接进行至少另一次反应。

2.权利要求1的方法，其中所述固定化的脂肪分解酶选自下组：细毛嗜热霉(Thermomyces lanuginose)脂肪酶；南极假丝酵母(Candida Antarctica)A脂肪酶；南极假丝酵母B脂肪酶；Candida deformans脂肪酶；解脂假丝酵母(Candida lipolytica)脂肪酶；近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)脂肪酶；皱落假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶；隐球菌属菌种(Cryptococcus spp.)S-2脂肪酶；曼赫根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶；德氏根毛霉(Rhizomucor delemar)脂肪酶；洋葱(假单胞菌)伯克霍尔德氏菌(Burkholderia(Pseudomonas)cepacia)脂肪酶；沙门柏干酪假单胞菌(Pseudomonas camembertii)脂肪酶；萤光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)脂肪酶；白地霉(Geotrichium candidum)脂肪酶；Hyphozyma sp.脂肪酶；产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)脂肪酶；及其变体。

3.权利要求1或2的方法，其中所述至少一种固定化脂肪分解酶加载量相对于底物为25.0％w/w以下；22.5％w/w以下；20.0％w/w以下；17.5％w/w以下；15.0％w/w以下；12.5％w/w以下；10.0％w/w以下；7.5％w/w以下；5.0％w/w以下；或2.5％w/w以下。

4.权利要求1-3任一项的方法，其中所述脂肪分解酶通过包埋于天然或合成基质如溶胶-凝胶、藻酸盐和角叉藻聚糖；通过交联方法如交联的酶晶体(CLEC)和交联的酶聚集物(CLEA)；或通过沉淀于盐晶体如包被蛋白的微晶体(PCMC)固定化于载体上。

5.权利要求4的方法，其中所述载体是选自下组的亲水载体：由氧化铝、氧化硅和硅酸盐组成的多孔无机颗粒如多孔玻璃、沸石、硅藻土、膨润土、蛭石、水滑石；和由糖聚合物组成的多孔有机颗粒如琼脂糖或纤维素。

6.权利要求1-5任一项的方法，其中底物中乙醇对脂肪酸的摩尔比例(EtOH∶FA)为至少3.5；4.0；4.5；5.0；5.5；6.0；6.5；7.0；7.5；8.0；8.5；9.0；9.5或10.0当量。

7.权利要求6的方法，其中连续或逐步添加乙醇。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中所述方法选自下组的工艺设计：分批、连续搅拌釜反应器、填充床柱和膨胀床柱反应器。

9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述底物选自下组：巴西棕榈油、琉璃苣油、加拿大低酸油、椰子油、玉米油、棉籽油、大麻油、麻风树油、卡兰贾油、芥子油、棕榈油、花生油、菜籽油、米糠油、大豆油和向日葵油、来自微藻的油、动物脂肪、牛脂、猪油、乳脂、禽类、海生动物油、鲔鱼油、福气鱼/好吉鱼肝油、脂肪酸馏出物、酸油、废油、经使用的油、甘油偏酯及其任意组合。

10.在通过将乙醇与包含甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、游离脂肪酸或其任意组合的底物反应获得的脂肪酸乙酯的产生中再使用至少一种固定于亲水载体上的脂肪分解酶，其中底物中乙醇对脂肪酸的摩尔比例(EtOH∶FA)为至少3.0当量；酶加载量相对于底物为30％w/w以下；且其中将用于转化反应之后的酶从所得的反应混合物分离，且不经修饰直接再使用于下一步转化反应。

11.通过权利要求1-9任一项的方法获得的组合物，其中所述组合物包含至少两种选自下组的成分：脂肪酸乙酯；甘油三酯；甘油二酯；甘油一酯；甘油和水。

12.权利要求11的组合物作为燃料的用途。

13.权利要求12的用途，其中所述组合物经精炼。