[发明专利]单和双PEG IL10的生产和用途

说明书

发明领域

本发明包括单聚乙二醇化（PEG）和双PEG IL-10组合物及其使用方法。

发明背景

细胞因子白介素-10(IL-10)是二聚体，在连接其2个单体亚基的非共价相互作用破坏后成为生物学上失活的。IL-10最初作为2型辅助T细胞的产物被鉴定，后来显示其可由其它细胞类型包括B细胞和巨噬细胞产生。其也抑制1型辅助T细胞产生的几种细胞因子例如γ-干扰素、IL-2和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的合成。IL-10抑制细胞介导的免疫应答调节剂和抑制抗原呈递细胞依赖性T细胞应答的能力证明IL-10具有免疫抑制特性。此细胞因子也抑制其它细胞因子例如IL-1, IL-6, IL-8, 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF), 粒细胞集落刺激因子(G- CSF)和TNF-α的单核细胞/巨噬细胞产生。由于其多效活性，已对IL-10进行研究用于多种临床应用，例如治疗炎性病症、细菌脓毒症、肠毒素引起的致死休克和自身免疫疾病，例如类风湿关节炎、同种异体移植排斥和糖尿病。

可通过免疫系统控制或根除癌症和肿瘤。免疫系统包括几类淋巴样和骨髓样细胞，例如单核细胞、巨噬细胞、树突细胞（DC）、嗜酸性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜碱性粒细胞。这些淋巴样和骨髓样细胞产生称为细胞因子的分泌信号蛋白。细胞因子包括例如白介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFNγ)、IL-12和IL-23。免疫应答包括炎症，即全身性或在体内特定位置的免疫细胞聚集。响应感染剂或外源物质后，免疫细胞分泌细胞因子，其进而调节免疫细胞的增殖、发育、分化或迁移。过度的免疫应答可产生病理学后果，例如自身免疫疾病，而损伤的免疫应答可导致癌症。免疫系统的抗肿瘤应答包括先天免疫性例如通过巨噬细胞、NK细胞和嗜碱性粒细胞介导的，和适应性免疫性，例如通过抗原呈递细胞（APC）、T细胞和B细胞介导的（见例如Abbas等人 (编) (2000) Cellular and Molecular Immunology, W.B. Saunders Co., Philadelphia, PA; Oppenheim and Feldmann (编) (2001) Cytokine Reference, Academic Press, San Diego, CA; von Andrian and Mackay (2000) New Engl. J. Med. 343:1020-1034; Davidson and Diamond (2001) New Engl. J. Med. 345:340-350）。

调节免疫应答的方法已在癌症例如黑色素瘤的治疗中使用。这些方法包括使用细胞因子例如IL- 2, IL-10, IL- 12, 肿瘤坏死因子-α (TNF α), IFNγ, 粒细胞巨噬细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和转化生长因子(TGF)或使用细胞因子拮抗剂（例如抗体）的治疗。白介素-10最初被表征为细胞因子合成抑制因子（CSIF；见例如Fiorentino等人 (1989) J. Exp. Med. 170:2081-2095）。IL-10是由T细胞、B细胞、单核细胞产生的多效细胞因子，其可作为免疫抑制剂和免疫刺激剂二者发挥功能（见例如Groux等人 (1998) J. Immunol. 160:3188-3193和Hagenbaugh等人 (1997) J. Exp. Med. 185:2101-2110）。

动物模型提示IL-10可以剂量依赖的方式引起NK-细胞活化和促进靶细胞的破坏（见例如Zheng等人 (1996) J. Exp. Med. 184:579-584; Kundu等人 (1996) J. Natl. Cancer Inst. 88:536-541）。进一步研究表明IL-10在肿瘤微环境中的存在与更好的患者存活有关（见例如Lu等人 (2004) J. Clin. Oncol. 22:4575-4583）。