[发明专利]人工染色体载体

权利要求书

1.在真核细胞系中生产蛋白质的方法，包括下述步骤：

a)提供人工染色体骨架，

b)将编码所述蛋白质的核酸重组入所述骨架中以生成表达载体，

c)将所述表达载体导入真核宿主细胞系中以获得真核表达细胞系，

d)培养所述表达细胞系以生成所述蛋白质，并

e)分离所述蛋白质。

2.依照权利要求1的方法，其中所述重组是用重组技术进行的，所述重组技术选自同源重组或整合酶介导的盒交换。

3.依照权利要求1或权利要求2的方法，其中将2至500个拷贝的所述载体导入所述宿主细胞系中。

4.供依照权利要求1至3任一项的方法中使用的载体，其基于包括编码分泌蛋白的基因的人工染色体。

5.依照权利要求4的载体，其中所述分泌蛋白包括信号肽。

6.依照权利要求4或5任一项的载体，其中所述分泌蛋白选自血清蛋白质，包括免疫球蛋白、免疫球蛋白片段或衍生物、清蛋白、血液因子、多肽激素、细胞因子、趋化因子、酶和生长因子、及它们的衍生物。

7.依照权利要求4至6任一项的载体，其中所述人工染色体是自细菌、噬菌体、酵母或哺乳动物衍生的。

8.依照权利要求4至7任一项的载体，其中所述人工染色体选自下组：BAC、PAC、YAC和粘粒。

9.依照权利要求4至8任一项的载体，其含有用于开放染色质形成的调节元件。

10.依照权利要求4至9任一项的载体，其含有天然的或异源的启动子。

11.依照权利要求4至10任一项的载体，其含有丰富蛋白质的基因座。

12.依照权利要求4至11任一项的载体，其含有哺乳动物或昆虫起源的基因座。

13.转基因细胞系，含权利要求4至12任一项的载体。

14.依照权利要求13的细胞系，其中所述载体含有同种异基因的基因座。

15.染色体，含有依照权利要求4至12任一项的载体。