[发明专利]大肠埃希氏菌介导的β-连环蛋白的基因干扰

权利要求书

1.包含原核载体的侵袭性大肠埃希氏细菌，所述载体包含编码一个或多个siRNA的一个或多个DNA分子、经修饰的P_lacUV5启动子、至少一个Inv基因座和至少一个HlyA基因，其中所述siRNA干扰β-连环蛋白的mRNA，并且与野生型大肠埃希氏细菌相比，所述侵袭性大肠埃希氏细菌的RNase III活性降低。

2.原核载体，其包含编码一个或多个siRNA的一个或多个DNA分子、经修饰的P_lacUV5启动子、至少一个Inv基因座和至少一个HlyA基因，其中所述siRNA干扰β-连环蛋白的mRNA。

3.向哺乳动物细胞递送一个或多个siRNA的方法，所述方法包括向所述哺乳动物细胞中引入权利要求1所述的至少一种侵袭性大肠埃希氏细菌。

4.调节哺乳动物细胞中的基因表达的方法，所述方法包括向所述哺乳动物细胞中引入权利要求1所述的至少一种侵袭性大肠埃希氏细菌。

5.治疗或预防有需要的哺乳动物的与β-连环蛋白过表达相关的疾病或病变的方法，所述方法包括调节所述哺乳动物中β-连环蛋白的表达，其包括向所述哺乳动物的细胞中引入权利要求1所述的至少一种侵袭性大肠埃希氏细菌。

6.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述细菌中删除了编码RNase III的rnc基因。

7.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，与野生型大肠埃希氏细菌相比，所述RNase III活性降低至少90％。

8.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，与野生型大肠埃希氏细菌相比，所述RNase III活性降低至少95％。

9.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，与野生型大肠埃希氏细菌相比，所述RNase III活性降低至少99％。

10.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述一个或多个DNA分子在所述侵袭性细菌中被转录成一个或多个shRNA。

11.如权利要求10所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述一个或多个shRNA包含3’悬端或平末端。

12.如权利要求11所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述3’悬端为2-5个碱基对。

13.如权利要求11所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述3’悬端不超过2个碱基对。

14.如权利要求10所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述一个或多个shRNA被加工成一个或多个siRNA。

15.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述原核载体进一步包含至少一个终止子序列。

16.如权利要求15所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述至少一种终止子序列包含至少5个连续的胸苷碱基对。

17.如权利要求15所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述细菌进一步包含第二终止子序列。

18.如权利要求17所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述第二终止子序列为rrnC终止子序列。

19.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述原核启动子进一步包含至少一个UP元件。

20.如权利要求1所述的侵袭性大肠埃希氏细菌，其中，所述侵袭性细菌为减毒的、不致病的或无毒的细菌。

21.组合物，其包含权利要求1所述的侵袭性细菌和药学上可接受的载体。

22.如权利要求5所述的方法，其中，用约10³-10¹¹侵袭性细菌感染所述哺乳动物细胞。

23.如权利要求22所述的方法，其中，用约10⁵-10⁹侵袭性细菌感染所述哺乳动物细胞。

24.如权利要求5所述的方法，其中，以约0.1-10⁶范围的感染复数感染所述哺乳动物细胞。