[发明专利]促进靶miRNA生产的两亲肽和调控靶miRNA生产的方法

权利要求书

1.包含一种或多种两亲α螺旋肽的两亲肽文库，其中，一个所述α螺旋肽含有4～12个Leu(亮氨酸，L)，而且在疏水氨基酸中，一个或多个亮氨酸残基被Try(色氨酸，W)取代。

2.根据权利要求1所述的两亲肽文库，其中，所述两亲肽文库包括一种或多种两亲α螺旋肽，所述两亲α螺旋肽的氨基酸序列为以一个或两个疏水的亮氨酸(L)和亲水的赖氨酸(K)或甘氨酸(G)交替排列，其中两个赖氨酸(K)被两个色氨酸(A)取代。

3.根据权利要求1所述的两亲肽文库，其中，所述两亲肽文库包括一种或多种两亲α螺旋肽，所述的两亲α螺旋肽的氨基酸序列如SEQ ID No：2～SEQ ID No：9，或SEQ ID No：12～SEQ ID No：21所示。

4.一种检测与发夹状靶miRNA前体特异性结合的两亲肽的方法，所述方法包括：

1)制备权利要求1所述的两亲肽文库；

2)合成发夹状靶miRNA前体和作为对照的一种或多种发夹状非靶miRNA前体；

3)混合所述两亲肽、发夹状靶miRNA前体或非靶miRNA前体和探针分子后，测定两亲肽对miRNA前体的结合亲和力；以及

4)筛选对靶miRNA前体的结合亲和力大于对发夹状非靶miRNA前体的结合亲和力的两亲肽。

5.一种检测与两亲肽特异性结合的miRNA前体的方法，该方法包括：

1)制备权利要求1所述的两亲肽文库；

2)合成待检测的发夹状靶miRNA前体和作为对照的一种或多种发夹状非靶miRNA前体以筛选所述两亲文库；

3)混合所述两亲肽、发夹状靶miRNA前体或非靶miRNA前体和探针分子后，测定miRNA前体对两亲肽的结合亲和力；以及

4)筛选对两亲肽的结合亲和力大于非靶miRNA前体的靶miRNA前体。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中，步骤2)中的miRNA前体选自下组：pre-let-7a-1、pre-miR16-1和pre-miR24-1。

7.根据权利要求4或5所述的方法，其中，步骤3)中的探针为一种带标签的化合物，所述化合物能与两亲肽竞争结合发夹状靶miRNA前体。

8.一种检测增加靶miRNA生产的两亲肽的方法，该方法包括：

1)制备权利要求1所述的两亲肽文库；

2)培养用所述两亲肽处理后的细胞系；

3)测定所述细胞系的靶miRNA的表达水平；以及

4)筛选与未处理对照组相比，增加靶miRNA表达水平的两亲肽。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，步骤2)中的细胞系为结肠癌细胞系。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，步骤3)中的miRNA选自下组：let-7a-1、miR16-1和miR24-1。

11.根据权利要求8所述的方法，其中，步骤3)中的表达水平为选自下组：Northern印迹、RT-PCR和微阵列。

12.一种用于促进对两亲肽特异的靶miRNA生产的组合物，其包括作为活性组分的根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽。

13.一种用于促进对两亲肽特异的靶miRNA生产的方法，其包括给受试者施用根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽。

14.一种用于因对两亲肽特异的miRNA受到抑制引起的疾病的治疗药物或诊断试剂，其包括作为活性组分的根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽。

15.根据权利要求14所述的治疗药物或诊断试剂，其中，所述疾病为选自下组：结肠癌、前列腺癌、睾丸癌、小肠癌、结肠直肠癌、肛门癌、食道癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、宫颈癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌和白血病。

16.一种促进体外靶miRNA前体加工的方法，该方法包括：

1)用体外存在的miRNA前体处理根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽；以及

2)使两亲肽和靶miRNA前体结合。

17.根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽在制备用于促进对两亲肽特异的靶miRAN前体生产的组合物中的应用。

18.根据权利要求4或8所述方法筛选的两亲肽在制备用于因对两亲肽特异的靶miRNA受到抑制引起的疾病的治疗药物或诊断试剂中的应用。