[发明专利]使用金属卟啉治疗丙型肝炎感染

说明书

联邦资助的研究或开发

本发明在美国政府支持下获得，NIH/NIDDK资助号为RO1-DK38825。美国政府享有本发明的某些权利。

技术领域

本发明涉及用于治疗丙型肝炎感染的方法和制剂。

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的肝的血源性传染病。HCV是包括肝硬化和肝癌在内的急性肝炎和慢性肝疾病的主要原因。据估计丙型肝炎在全世界感染了超过1亿8千万人，在美国感染了4百万人。在美国丙型肝炎是肝移植的主要原因，每年在美国约10,000～20,000例死亡归因于HCV感染。

HCV是正链RNA病毒，长度为约9.6kb，并且是黄病毒科(Flaviviridae)中丙型肝炎病毒属的唯一已知成员。HCV编码具有约3010个氨基酸的单个多聚蛋白，该多聚蛋白然后被加工成结构蛋白(C、E1、E2)和非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。所述非结构病毒蛋白启动负链RNA的合成，该负链RNA充当产生新正链病毒基因组的复制模板。非结构蛋白5A(NS5A)是HCV蛋白的重要成分，是447个氨基酸的磷酸化锌-金属蛋白，具有极为未知的功能。最近的研究表明，NS5A在HCV的复制中起着重要作用，既通过调节病毒RNA复制直接起作用，也通过调节宿主细胞环境以有利于病毒而间接起作用，并且也在JFH1感染细胞中的丙型肝炎病毒颗粒的组装方面起重要作用。

治疗HCV感染的最常见形式是聚乙二醇化干扰素α和抗病毒药三氮唑核苷的组合。治疗期取决于基因型，通常进行24周或48周。治疗的适应症包括罹患经证实的丙型肝炎病毒感染和持续的肝功能测试异常的患者。但是，该治疗在多达46％的受治疗人中不能产生持续的病毒学响应。该治疗还具有从“流感样”综合征到严重的不利事件等令人不快的副作用，所述不利事件包括贫血、心血管事件和诸如自杀或自杀意图等精神病问题。基于聚乙二醇化干扰素α和三氮唑核苷的组合的当前治疗还较昂贵，对于发展中国家的患者通常代价过高。

因此，仍然存在对用于治疗HCV感染的新型治疗方法的需要。

发明内容

本发明通过提供经由减少受感染细胞中NS5A细胞的水平来治疗罹患HCV感染的细胞或哺乳动物的方法和制剂，而满足了至少某些上述需要。根据本发明，NS5A蛋白水平的减少通过使用金属卟啉治疗丙型肝炎感染而实现。特别地，本发明基于以下发现：NS5A蛋白通过参与多聚蛋白切割、干扰素响应和细胞信号传导途径在HCVRNA复制中起关键作用。已经发现，诸如锌卟啉等金属卟啉在泛素-蛋白酶体降解途径中诱导HCV NS5A蛋白的翻译后下调。即，金属卟啉可用于激活NS5A蛋白分解代谢的泛素-蛋白酶体途径。结果，金属卟啉可用于在受HCV感染的细胞中显著抑制HCV病毒复制。

本发明中，已经发现金属卟啉通过将NS5A蛋白的半衰期从约19.8小时降低到约1.2小时而减少NS5A蛋白的稳定性，并且显著地诱导NS5A的多泛素化。结果，可以显著地减少HCV RNA复制。泛素(Ub)最初被鉴定为真核细胞中的高度保守的小蛋白，由76个氨基酸组成，预测分子量为8.5kD。已经普遍接受泛素-蛋白酶体降解途径在诸如细胞周期、DNA修复、胚胎发生、转录的调节以及凋亡等许多细胞过程中是重要的调节系统。在泛素-蛋白酶体途径中，蛋白质底物首先通过与多个泛素分子形成共价键(多泛素化)而被标记以用于降解，然后被26S蛋白酶体(一种2000kDa的ATP-依赖性蛋白水解复合物)水解。因此，对NS5A蛋白进行多泛素化诱导可以引起HCV RNA复制的减少。还已经发现，金属卟啉可用于在稳定表达HCV蛋白的人类肝细胞瘤细胞中以剂量-依赖性方式下调NS5A蛋白水平。

在优选实施方式中，治疗HCV感染的方法包括使用诸如锌中卟啉(ZnMP)或锌原卟啉等锌卟啉治疗受感染细胞。已经发现，ZnMP和ZnPP都诱导NS5A的多泛素化并且展示抗病毒活性。已经发现锌卟啉对于治疗HCV感染特别有用，因为其通常易于被完整肝细胞吸收。

在一个实施方式中，本发明还涉及用于治疗HCV感染的制剂。在一个具体实施方式中，本发明提供了包含锌卟啉和白蛋白的制剂。当作为白蛋白复合物施用时，锌卟啉是无毒的，并且优先被肝和脾吸收。

在另一实施方式中，已经发现可将金属卟啉与其它抗病毒治疗方法组合使用，从而提供累加效应或协同效应。例如，本发明的制剂可以包括金属卟啉与一种或多种诸如α-干扰素、β-干扰素和/或γ-干扰素等干扰素的组合。

因此，本发明提供用于治疗HCV感染的方法和制剂。

附图说明