[发明专利]用于治疗血管性血友病的FVIII突变蛋白

说明书

本申请要求2008年6月4日提交的美国临时申请流水号61/058,795的权益，通过提及而完整将其内容收入本文。

发明领域

本发明涉及可用于治疗血管性血友病(von Willebrand Disease，vWD)的因子VIII(FVIII)突变蛋白及其衍生物。FVIII突变蛋白容许在限定位点处偶联至一种或多种生物相容性聚合物诸如聚乙二醇。另外，提供了用于治疗目的的其相关配制剂、剂量、和施用方法。这些经修饰的FVIII变体、及相关组合物和方法可用于为罹患血管性血友病的个体提供具有降低的注射频率和降低的免疫原性响应的治疗选项。

发明背景

vWD是一项描述各种病因学的一簇遗传性或获得性疾病的术语。许多类型的vWD的基础在于von Willebrand因子(vWF)的功能，所述von Willebrand因子(vWF)是一系列多聚体血浆糖蛋白，其除其它特性外还结合促凝血性FVIII，而且延长天然FVIII在血液循环中的半衰期(参见例如Federici，Haemophilia 10(suppl 4)：169，2004；Denis等，Thromb.Haemost.99：271，2008)。在正常人中，FVIII的半衰期是没有vWF情况中的约8分钟和存在vWF情况中的8小时。

在轻度形式(1型)中，vWD是非常常见的，影响着群体中100人中多至1名，而且相等地影响着男性和女性。

2型vWD可以是一种严重形式的vWD，而且已知处于5种亚型：2A、2B、2C、2M和2N。这些之中，2N型以缺乏FVIII对vWF的结合表征。如此，在2N型vWD患者中，FVIII被快速降解，并且循环中的水平是低的。vWF 2N型是由损害对FVIII结合的纯合的或复合杂合的vWF突变引起的。因为不与vWF形成复合物的游离FVIII自循环快速清除，所以vWD 2N伪装为常染色体隐性形式的血友病A。然而，患者通常具有正常水平的vWF抗原和用于vWF-血小板GP1b结合的瑞斯托菌素辅因子活性(vWF:RCo活性)，但降低的FVIII水平。

3型vWD(即Eric von Willebrand最初在一个芬兰人家庭中描述的形式)是vWF的纯合缺乏(缺陷)(deficiency)或双杂合缺乏。vWD 3型是由无义突变或由于进入编码vWF的核酸中的小插入或缺失所致的移码引起的，这导致vWF的完全或几乎完全缺乏。在大多数情况中，vWF:RCo和vWF:Ag是检测不到的，而FVIII水平是深深地降低的。3型vWD患者可以具有关节血肿(hemarthroses)和出血入关节或间隙中，这很像血友病。

获得性vWD通常是由自身免疫清除(这是由于形成抗vWF抗体)、流体剪应力诱导的蛋白酶解或升高的对血小板或其它细胞的结合引起的。获得性vWD综合征与那些vWD 3型的相似，具有降低水平的vWF-Ag、vWF:Rco和FVIII。vWD 3型和获得性vWD患者不仅患有作为vWD特征的粘膜出血，而且还患有作为血友病A特征的软组织、肌肉、和关节出血。

血友病A是最常见的遗传性凝固病症，估计的发病率为每5000名男性1名。它是由FVIII(即血液凝固的固有途径的一种至关重要的成分)的缺乏或结构缺陷引起的。对血友病A的目前治疗牵涉静脉内注射人FVIII。人FVIII已经作为约300kD的单链分子重组生成。它由结构域A1-A2-B-A3-C1-C2构成(Thompson，Semin.Hematol.29：11-22，2003)。前体产物在高尔基体中被加工成200kD(重)和80kD(轻)的两条多肽链，其中两条链通过金属离子保持在一起(Kaufman等，J.Biol.Chem.263：6352，1988；Andersson等，Proc.Natl.Acad.Sci.83：2979，1986)。

FVIII的B域似乎是不必要的，因为B域缺失型FVIII(BDD，90kD A1-A2重链和80kD轻链)也已经显示了作为代替疗法用于血友病A是有效的。B域缺失型FVIII序列含有B域的几乎(all but)14个氨基酸的缺失。