[发明专利]用于筛选具有增加受疟原虫属原生动物寄生虫感染的红血球细胞刚性的能力的化合物的方法，用于过滤红血球细胞的方法，及它们的应用

权利要求书

1.筛选能增加受疟原虫属原生动物寄生虫感染的红血球细胞(RBC)刚性的化合物的方法，所述方法包含下述步骤或由下述步骤组成：

a)培育受所述寄生虫感染的RBC，并可选地和单独地培育未感染RBC，每种培育均在存在和不存在待测试化合物的情况下进行，其中测试所述化合物增加且具体为选择性增加受感染RBC(iRBC)的刚性的能力；和，

b)测定在存在所述化合物的情况下培育的一种或几种iRBC的变形能力，和不存在所述化合物的情况下培育的一种或几种iRBC的变形能力；和，

c)可选地，测量在存在所述化合物的情况下一种或几种未感染RBC的变形能力，和不存在所述化合物的情况下一种或几种未感染RBC的变形能力，

其中与在不存在相同化合物的情况下培育的iRBC相比，在存在化合物的情况下培育的iRBC的变形能力下降至少5％，优选至少10％，并且更优选至少15％，则表明所述化合物能增加iRBC的刚性。

2.根据权利要求1的方法，其中所述iRBC是环状-宿主RBC和/或配子体-宿主RBC，特别是成熟配子体-宿主RBC。

3.根据权利要求1或2的方法，其中步骤a)使用的iRBC通过下述步骤获得：

-用iRBC，特别是用其中裂殖体阶段iRBC已经富集的iRBC培育物，感染RBC，优选小于8天的RBC，所述富集例如通过用凝胶溶液例如处理而进行。

4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤a)和/或权利要求3的步骤之前进行下述步骤：

-例如通过一次或几次山梨醇处理而进行iRBC的寄生虫或裂殖体富集iRBC培育物的寄生虫的同步化，。

5.根据权利要求1至4中任一项的方法，其中

-筛选在存在所述化合物的情况下培育的未感染RBC的变形能力，其与在不存在所述化合物的情况下培育的未感染RBC的变形能力相同或者相差小于5％，和

-可选地，筛选在存在所述化合物的情况下裂殖体-iRBC的变形能力，其与在不存在所述化合物的情况下裂殖体-iRBC的变形能力近似相同或者相差小于5％。

6.根据权利要求1至5中任一项的方法，其中进行的所述筛选是低通量筛选或高通量筛选。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中在群体细胞水平和/或个体细胞水平测定RBC和iRBC的变形能力。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中RBC和iRBC的变形能力通过检电器、激光衍射计、微流体设备、微量吸管和/或光钳测定。

9.根据权利要求8的方法，其中激光衍射计是商业自动化仪器，优选为激光辅助光旋转细胞分析仪(LORCA；Mechatronics，Hoorn，Netherlands)或RHEODYN-SSD(Myrenne，Roetgen，Germany)，并且更优选LORCA。

10.根据权利要求8或9的方法，其中RBC和iRBC的变形能力在从0.3至30帕斯卡(Pa)的切应力范围内测定，包括1.7Pa和30Pa。

11.根据权利要求1至10中任一项的方法，其中iRBC的寄生虫感染量水平是占细胞群体的至少20％或30％，优选为占细胞群体的至少50％，并且更优选为占细胞群体的至少70％。

12.根据权利要求1至11中任一项的方法，其中通过参照伸长指数(EI)进行变形能力的测定。

13.根据权利要求12的方法，其中在100％寄生虫感染量，30Pa外推时，对于在存在所述化合物的情况下培育的iRBC，EI低于0.43，更优选低于0.42，则表明所述化合物能增加iRBC的刚性。

14.根据权利要求1至13中任一项的方法，其中所述未感染和感染RBC是人RBC。

15.根据权利要求1至14中任一项的方法，其中所述寄生虫选自下组：热带疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、三日疟原虫、诺氏疟原虫、猪尾猴疟原虫、食蟹猴疟原虫、似卵形疟原虫、巴西疟原虫、许氏疟原虫和吼猴疟原虫，优选选自下组：热带疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、诺氏疟原虫和三日疟原虫，和更优选选自下组：热带疟原虫和间日疟原虫。