[发明专利]对DNA进行定量或检测的方法

权利要求书

1.一种方法，其是对标本中所含的具有目标DNA区域的DNA进行定量或检测的方法，其特征在于，具备：

(1)从标本制备要检测目标DNA区域的DNA的第一工序；

(2)用DNA甲基化酶对由第一工序制备的DNA进行处理的第二工序；

(3)从经第二工序处理后的DNA制备单链甲基化DNA的第三工序；

(4)第四工序，其中，使由第三工序制备的单链甲基化DNA、甲基化DNA抗体、具有如下碱基序列的特定寡核苷酸混合，形成具有甲基化后的目标DNA区域的单链甲基化DNA、该甲基化DNA抗体与该特定寡核苷酸的复合体，

所述碱基序列不抑制单链甲基化DNA中的目标DNA区域的被甲基化后的一个以上的碱基与该甲基化DNA抗体的结合，且可以通过互补性与具有目标DNA区域的单链DNA结合；及

(5)第五工序，其中，对由第四工序形成的复合体中所含的所述甲基化DNA抗体，利用其识别功能进行定量或检测，由此，对所述单链甲基化DNA中的具有目标DNA区域的DNA进行定量或检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

第四工序中，在含有二价阳离子的反应体系中使复合体形成。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，

二价阳离子是镁离子。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

在第五工序开始之前，使第四工序形成的复合体中所含的抗体和支持体结合。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，

在第五工序开始之前，使第四工序形成的复合体中所含的特定寡核苷酸和支持体结合。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，

DNA甲基化酶是胞嘧啶甲基化酶。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，

DNA甲基化酶是SssI甲基化酶。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，

甲基化DNA抗体是甲基胞嘧啶抗体。

9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，

标本是下述任一种标本：

(a)哺乳动物来源的血液、体液、粪尿、体分泌物、细胞溶解液或组织溶解液；

(b)从选自哺乳动物来源的血液、体液、粪尿、体分泌物、细胞溶解液及组织溶解液的一种中提取的DNA；

(c)以从选自哺乳动物来源的组织、细胞、组织溶解液及细胞溶解液的一种中提取的RNA为模板而制作的DNA；

(e)从细菌、真菌或病毒中提取的DNA；或

(f)以从细菌、真菌或病毒中提取的RNA为模板而制作的DNA。

10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，

要检测目标DNA区域的DNA是下述的任一种DNA：

(a)预先用不以目标DNA区域为识别剪切位点的限制酶进行了消化处理的DNA、

(b)预先精制后的DNA、

(c)血液中的游离DNA、

(d)微生物基因组来源的DNA、或

(e)通过逆转录酶由RNA生成的DNA。

11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，

在第四工序中的复合体形成时，添加反向寡核苷酸。

12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，

在第一工序中，在用于从标本制备DNA的DNA提取操作中所使用的溶液中的钠盐的浓度为100mM以上1000mM以下。

13.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，

在第一工序中，在用于从标本制备DNA的DNA提取操作中所使用的溶液中的钠盐的浓度为100mM以上200mM以下。

14.一种方法，其是筛选癌症患者来源的标本的方法，其中，包括如下工序：

利用权利要求1～13中任一项所述的方法使用被检者来源的标本而定量或检测的DNA的定量结果或检测结果、与利用相同方法使用健康者来源的标本而定量或检测的DNA的定量结果或检测结果之间的差异如有显著性意义，则将被检者来源的标本作为癌症患者来源的标本进行评价，根据该评价的结果来鉴定癌症患者来源的标本。