[发明专利]键合有反应性物质的微粒的稳定化方法及含有该微粒的试剂

说明书

技术领域

本发明涉及键合有抗体或抗原等具有反应性的物质的微粒(以下简称反应性物质键合微粒)的稳定化方法及使用该反应性物质键合微粒的免疫测定用试剂。特别是涉及主要在临床检查领域用于利用抗原抗体反应的免疫学测定的反应性物质键合微粒的稳定化方法及使用该反应性物质键合微粒的免疫测定用试剂。

背景技术

近年来，在临床检查等各种检查中，正在谋求自动化和测定时间的缩短化。例如，利用免疫反应测定生物样品中的微量物质的方法得到广泛使用。作为该免疫测定方法，可列举出RIA法、EIA法、免疫比浊法、胶乳凝集法、胶体金凝集法、免疫色谱法等。其中，胶乳凝集法、胶体金凝集法等使用键合有具有反应性的物质的微粒(反应性物质键合微粒)的方法由于不需要反应液的分离和洗涤操作，所以特别适合测定的自动化和短时间化。

但是，上述胶乳凝集法和胶体金凝集法由于反应性物质键合微粒在分散液中不稳定，因为沉降或自身凝集等无法长时间维持反应性，所以存在难以在不降低测定精密度的情况下长时间保存试剂的问题。

专利文献1中记载了包括使选自聚阴离子及其盐、葡聚糖、环糊精、聚乙二醇和丙三醇的至少1种共存于反应性物质键合微粒分散液中的工序的反应性物质键合微粒沉降抑制方法。该方法通过抑制试剂溶液中的反应性物质键合微粒沉降使反应性物质键合微粒稳定化。但是，当长时间保存含有反应性物质键合微粒的试剂时，反应性物质键合微粒发生自身凝集，存在反应性降低的问题。

专利文献2中记载了添加金属离子和螯合剂作为稳定剂的方法，专利文献3中记载了添加钙离子、镁离子、硫酸葡聚糖、胆酸、去氧胆酸、黄尿酸或这些物质的盐的方法。但是，依然存在自身凝集、反应性降低等问题。

而专利文献4中记载了以在具有硫醇基和氨基的化合物共存下还原氯金酸为特征的具有阳离子性表面的金纳米粒子的制备方法(权利要求项1)。在专利文献5中记载了作为包覆混合单层膜的金属质纳米粒子的硫普罗宁(チオプロニンtiopronin)单层膜保护金纳米粒子的合成法(实施例3)。专利文献6中记载了免疫反应性凝集剂，其特征在于，相对于金粒子介由半胱氨酸中的硫原子键合含有至少1个上述半胱氨酸的肽(权利要求1)。但是，这些均是示出仅以提高反应性为目的而将物质键合于金粒子表面上的金粒子的制备方法的文献，并未公开金粒子的稳定化方法。

在先技术文献

专利文献

专利文献1 : 日本特开2007-114129号公报

专利文献2 : 日本特开2000-146967号公报

专利文献3 : 日本特开平11-101799号公报

专利文献4 : 日本特开2005-287507号公报

专利文献5 : 日本特表2005-534810号公报

专利文献6 : 日本特开2006-317401号公报 。

发明内容

发明所要解决的课题

因此，为了在不降低测定精密度的情况下实现试剂的长时间保存，需要使反应性物质键合微粒在分散液中稳定化，从而长时间维持反应性的技术。

因此，本发明的目的在于：提供在反应性物质键合微粒的分散液中使该微粒稳定化的方法。本发明的目的还在于：提供含有可长时间维持反应性的反应性物质键合微粒的、在不降低测定精密度的情况下可长时间保存的试剂。

解决课题的手段

本发明人为达成上述课题而进行深入研究，结果发现：在反应性物质键合微粒的分散液中，通过使含硫氨基酸或其衍生物共存，可使反应性物质键合微粒稳定化，且可长时间维持反应性物质键合微粒的反应性，从而完成本发明。

本发明提供键合于具有反应性的物质的微粒的稳定化方法，该方法包括使含硫氨基酸或其衍生物共存于该微粒的分散液中的工序。

在1个实施方式中，上述含硫氨基酸为选自半胱氨酸、胱氨酸和蛋氨酸的至少1种。

在其它实施方式中，在上述分散液中以0.001~2.0质量%的比例含有上述含硫氨基酸或其衍生物。

在另一实施方式中，包括进一步使沉降抑制物质共存于上述分散液中的工序。

在另一实施方式中，上述沉降抑制物质为选自聚阴离子及其盐、葡聚糖、环糊精、聚乙二醇和丙三醇的至少1种。

在另一实施方式中，上述聚阴离子为硫酸葡聚糖或肝素。

在另一实施方式中，上述键合有具有反应性的物质的微粒为键合有抗体或抗原的胶体金粒子。

本发明的试剂含有键合有具有反应性的物质的微粒和含硫氨基酸或其衍生物，因此使该微粒稳定化。

在1个实施方式中，上述含硫氨基酸为选自半胱氨酸、胱氨酸和蛋氨酸中的至少1种。