[发明专利]使用自我装配疫苗的免疫治疗

说明书

相关申请

本申请要求于2008年4月18日申请的美国临时申请顺序号61/046,195的优先权，所述临时申请的全部内容都通过引用结合到本文中。

背景

用疫苗进行免疫接种一直是对抗疾病和感染威胁的保护作用的基础。在疫苗开发上的主要困难是针对特定威胁而快速匹配疫苗或抗毒素。当前的疫苗开发策略依赖于对所针对的抗原的鉴定和表征，以成功消除感染或疾病。当前的疫苗开发策略是时间密集型和劳动密集型的并且只能在一旦出现威胁时才开始着手。对于产生个性化疫苗，以抗击在不同个体中靶抗原不同的疾病而言，这样的策略也是不实用的。因此，如果发生新的重大威胁，而在控制这类威胁之前又没有足够时间来鉴定和表征靶抗原时，当前的疫苗开发策略是无法胜任的。对于普通人群产生个性化疫苗而言，当前的疫苗开发策略也是无法胜任的。

因此，需要一个技术平台，用于产生个性化疫苗并控制快速发展、快速作用和/或具有高度感染性的重大威胁。

发明概述

一方面，本发明的特征在于这样的药物组合物：可将所述组合物给予受试者，以诱导针对目标抗原的免疫应答。在一个实施方案中，所述组合物包含与生物素结合蛋白融合的热激蛋白。在另一个实施方案中，所述组合物包含与生物素结合蛋白融合并与至少1、2、3或4个生物素化组分非共价结合的热激蛋白。在某些实施方案中，生物素化组分是相同或不同分子。生物素化组分的非限制性实例包括生物素化蛋白、细胞和病毒。生物素化蛋白的非限制性实例包括生物素化抗原、抗体和共刺激分子。

本发明的组合物可预防性地用于提高针对目标抗原的免疫力，阻止病毒或细胞在表达和表现目标抗原或呈递其部分的受试者中的建立和增殖。如此，就可以达到阻止表达目标抗原的肿瘤或外源细胞的建立和增殖的目的。本文所提供的组合物也可治疗性地用于先前已感染病毒或携带所述细胞的受试者，以阻止病毒或细胞进一步增殖或者消除增殖的受试者细胞，包括表达和表现目标抗原或呈递抗原部分的肿瘤细胞。

在另一个实施方案中，组合物包含能够指导本文所提供的与生物素结合蛋白融合的热激蛋白和/或有待生物素化的蛋白质的表达的表达载体。

在还一个实施方案中，本发明提供用于产生自我装配的药物组合物的方法，所述方法包括使与生物素结合蛋白融合的热激蛋白与4个生物素化组分接触，其足以形成所述热激蛋白和所述4个生物素化组分的非共价复合物，其中所述4个生物素化组分中至少2个是不同的。本发明也提供在受试者中诱导免疫应答的方法，所述方法包括给予所述受试者与生物素结合蛋白融合的热激蛋白和4个生物素化组分，其中所述4个生物素化组分中至少2个是不同的。本发明还提供在受试者中增加治疗药效力的方法，所述方法包括给予所述受试者与生物素结合蛋白融合的热激蛋白和4个生物素化组分，其中所述4个生物素化组分中至少2个是不同的。

给予生物素化单克隆抗体和与生物素结合蛋白融合的热激蛋白可极大地增强可用的多克隆抗体的免疫功效和效力，否则它们将只能作为弱的疫苗免疫原。此外，针对特定靶抗原的单克隆抗体或免疫血清单独使用就足以产生免疫刺激复合物，所述复合物能刺激针对目标抗原的抗体的产生并刺激细胞毒性T细胞。最终，本文所述的药物组合物将避开对每种抗原特异性scFv和/或抗体而言都要产生scFv特异性热激融合蛋白的需要。

因此，本发明在以下方面提供明显优于现有技术的优势：1)针对未鉴定、未表征的抗原的疫苗制备；2)个性化疫苗的制备；3)药物组合物(例如疫苗)的快速产生，这反过来又能增加这类药物组合物的生产能力；和4)“增强(supercharging)”现有治疗药，例如单克隆抗体。本文所述的技术提供用于固定和强效佐剂与不同抗原、肽或抗原靶向分子(包括单链抗体的肿瘤抗原特异性单克隆抗体)的自我装配。

在发明详述和权利要求书中将会描述更多的特征和优势。

附图简述

图1表明pET-45b(+)表达载体的修饰。A)SfiI限制位点插入的示意图。B)修饰pET-45b(+)载体的最终多克隆位点。

图2显示将NotII限制位点和XhoI限制位点引入MTBhsp70。使用与MTBhsp70的N端和C端重叠的引物，通过PCR引入NotI位点和XhoI位点。所得PCR产物示于第1道。

图3显示NotI和XhoI对扩增MTBhsp70的消化，得到如凝胶图所示的2个条带。序列分析确定了内部NotI位点和SfiI位点的存在。