[发明专利]选择方法II

权利要求书

1.一种用于产生转化植物细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)用基因构建物转化所述植物细胞，

其中，所述基因构建物包括旁侧转化盒的第一和第二同源重组元件，

其中，所述第一和第二同源重组元件能够引导所述转化盒整合到存在于所述植物细胞中的至少一种质体的基因组中，

其中，所述转化盒包括：

(a)在所述植物细胞中可操作的第一启动子，

(b)切除盒，

(c)一种或多种转基因，

(d)第一终止元件，

其中所述切除盒包括：

(b1)第一位点特异性重组元件，

(b2)可选的第二启动子，

(b3)编码植物激素生物合成多肽IPT(异戊烯基转移酶)、iaaH(吲哚乙酰胺水解酶)以及iaaM(色氨酸单加氧酶)的一个或多个核苷酸序列，

(b4)第二终止元件，

(b5)第二位点特异性重组元件，

其中，所述第一和第二位点特异性重组元件能够由重组酶识别。

2.一种用于产生转化植物细胞的方法，所述方法包括以下步骤：

(i)用基因构建物转化所述植物细胞，

其中，所述基因构建物包括旁侧转化盒的第一和第二同源重组元件，

其中，所述第一和第二同源重组元件能够引导所述转化盒整合到存在于所述植物细胞中的至少一种质体的基因组中，

其中所述转化盒包括：

(a)在所述植物细胞中可操作的第一启动子，

(b)切除盒，

(c)一种或多种转基因，

(d)第一终止元件，

其中所述切除盒包括：

(b1)第一位点特异性重组元件，

(b2)可选的第二启动子，

(b3)编码一种或多种植物激素生物合成多肽的一个或多个核苷酸序列，

(b4)第二终止元件，

(b5)第二位点特异性重组元件，

其中，所述第一和第二位点特异性重组元件能够由重组酶识别。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法，其中，所述方法另外包括以下步骤：

(ii)用缺乏一种或多种所述植物激素生物合成多肽的培养基选择转化植物细胞。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述方法另外包括以下步骤：

(iii)在所述植物细胞中表达重组酶，其中所述重组酶是识别所述第一和第二位点特异性重组元件的重组酶。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述第一和第二位点特异性重组元件是lox位点。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述重组酶是Cre重组酶。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述植物激素生物合成多肽是涉及植物细胞分裂素或植物生长素或其它植物生长调节剂的合成、或调节植物细胞分裂素或植物生长素或其它植物生长调节剂的生产或代谢的多肽。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述植物激素生物合成多肽选自IPT(异戊烯基转移酶)、iaaH(吲哚乙酰胺水解酶)以及iaaM(色氨酸单加氧酶)。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述一种或多种转基因中的至少一种编码抗体、抗生素、除草剂、疫苗抗原、酶、酶抑制剂或设计肽。

10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，选择所述同源重组元件的核苷酸序列，使得所述转化盒特异性地靶向一种或多种所选的质体。

11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，选择所述同源重组元件的核苷酸序列，使得没有或基本上没有转化盒被整合到所述植物的核基因组中。

12.根据权利要求4至11中任一项所述的方法，其中，步骤(iii)包括从可操作性连接至核苷酸序列的可诱导启动子诱导所述植物细胞中重组酶的表达，所述核苷酸序列编码存在于所述植物细胞中的重组酶，其中所述重组酶识别所述第一和第二位点特异性重组元件。