[发明专利]具有延长的半衰期的因子IX缀合物

说明书

1.发明领域

本发明涉及因子IX的生物相容性聚合物缀合物、含有因子IX缀合物的组合物以及使用因子IX缀合物治疗血友病的方法。

2.发明概述

本申请者已确定重组因子IX(在本文中称为FIX)的制备可通过将FIX缀合至一个或多个生物相容性聚合物以使可将FIX与因子IXa(在本文中称为FIXa)有效分离来增强。增强的制备性质还包括产生高纯度FIX缀合物的能力。

FIX缀合物可以提供治疗益处，例如，当与未缀合的FIX相比时。此类治疗益处包括但不限于增加的循环半衰期、减少的免疫原性、更高的活性、更低的剂量需要以及允许可选择的施用途径(例如，皮下施用)。

如本文中所使用的，术语“因子IX缀合物”或“FIX缀合物”是指经修饰包含生物相容性聚合物的部分(该部分导致与未修饰因子IX相比改善的药物动力学特性(pharmacokinetic profile))的因子IX。药物动力学特性的改善可被观察为一个或多个下列参数的改善：效力(potency)、稳定性、曲线下面积和循环半衰期。

在特定的实施方案中，本文中所描述的高纯度FIX缀合物基本上不含FIXa。考虑到FIX组合物的污染物，根据Gray等人Thromb.Haemost.1995 Apr；73(4)：675-9)(通过引用合并入本文)，甚至痕量的FIXa可导致危险的血栓形成。

如本文中所使用的，术语“基本上不含FIXa的”在纯化FIX和FIX缀合物的上下文中，是指低于1u FIXa/1000 IU FIX的FIXa的量。按照Gray等人Thromb.Haemost.1995 Apr；73(4)：675-9中描述的技术可测量小浓度的FIXa。在一些实施方案中，FIXa污染物的量可低于0.5 u FIXa/1000IU FIX。在一些实施方案中，FIXa污染物的量可低物于0.25u FIXa/1000IU FIX。在一些实施方案中，FIXa的量可低于0.1u FIXa/1000IU FIX。

具有生物相容性聚合物的缀合FIX增强FIX缀合物与FIXa的可分离性，从而增强药物组合物中FIX的利用。此外，生物相容性部分可保护FIX免受降解和抗体应答。FIX缀合物可具有延长的循环半衰期，这可导致剂量节约效应(dose-sparing effect)和更少的施用频率。在特定的实施方案中，将FIX缀合至一个或多个聚乙二醇(PEG)部分。在另一个特定的实施方案，将FIX缀合至一个或多个多聚唾液酸部分。在另一个特定的实施方案中，将FIX缀合至白蛋白。

因此在第一方面，本发明表征了通过一个或多个半胱氨酸残基缀合至FIX的一个或多个生物相容性聚合物。在实施方案中，通过一个或多个半胱氨酸残基将一个或多个PEG部分缀合至FIX。

在一个实施方案中，可将FIX缀合物的生物相容性聚合物部分结合至在FIX上形成二硫键的两个半胱氨酸残基。因此，含有PEG的连接体桥接二硫键。在特定的实施方案中，按照通式I将生物相容性聚合物缀合至FIX：

其中这两个-S-都来自在FIX上形成二硫键的半胱氨酸残基，其中Q代表可以是直键、亚烃基(优选C_1-10亚烃基)或任选地取代的芳基或杂芳基的连接基团；

其中芳基包括苯基、苯酰基和萘基；

其中合适的杂芳基包括吡啶、吡咯、呋喃、吡喃、咪唑、吡唑、噁唑、哒嗪、嘧啶和嘌呤；

其中可通过针对水解不稳定的键或通过非不稳定性键(non-labilebond)的方式来连接聚合物。