[发明专利]转染的细胞的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及生产含有其中导入了期望的基因的T细胞的细胞群体的方法，其在医学领域是有用的。

背景技术

生物体主要由免疫反应来保护免于几种生物学侵入，免疫系统由各种细胞和它们产生的可溶性因子组成。在它们之中，白细胞，特别是淋巴细胞起到重要作用。这种淋巴细胞被分成两种主要类型，B淋巴细胞(在下文也称为B细胞)和T淋巴细胞(在下文也称为T细胞)，两者都特异性地识别抗原并作用于它们来防护生物体。

在外周部，具有CD(分化簇)4标记物的CD4 T细胞或具有CD8标记物的CD8 T细胞占据了T细胞的大部分。大部分的CD4 T细胞被称为辅助T细胞(在下文中描述为T_H)，涉及抗体生产的辅助和各种免疫反应的诱导，通过抗原刺激分化成Th1型或Th2型，其分别产生各种细胞因子。大部分CD8 T细胞通过抗原刺激分化成细胞毒性T细胞[Tc：细胞毒T淋巴细胞；别名：杀伤T细胞；在下文中也称为CTL]，其显示细胞毒性活性。

作为在外科手术、化学治疗和放射治疗之后对于癌症的第四种治疗，免疫治疗是令人感兴趣的。免疫治疗利用了人类本来拥有的免疫性，对患者的物理压力与其他疗法相比更小。转移淋巴因子活化的细胞、NK T细胞、γδT细胞等等的疗法，所述细胞是通过对根据各种方法离体(ex vivo)诱导的CTL、外周血淋巴细胞等等进行扩增获得的，树突状细胞转移疗法、肽疫苗疗法和Th1细胞疗法，通过所述Th1细胞疗法抗原特异性CTL的体内诱导是预期的，此外，免疫基因疗法，其中这些细胞离体用预计具有各种效果的基因转导并被转移到体内，等等，被称为免疫疗法。

一种细胞毒性T细胞(CTL)可以通过特异性T细胞受体(在下文中缩写为TCR)识别复合物，所述复合物是由主要组织相容性复合体(在下文中缩写为MHC)和抗原肽编码的、主要组织相容性复合体分子(MHC分子，对人类来说称为人类白细胞抗原；在下文中缩写为HLA)的共轭物，并可以杀死在细胞表面呈递这种复合物的细胞。

特异于目标抗原的细胞毒性活性可以通过将识别目标抗原的TCR的基因导入T细胞例如CTL来赋予。根据这个发现，使用TCR基因的基因疗法正在尝试靶向各种抗原，例如，MART 1(非专利文献1)、gp100(非专利文献2)和mHAG HA-2抗原(非专利文献3)。此外，基因疗法正在尝试利用编码来自人类的TCR、来自人类以外的生物体的TCR、识别目标抗原的抗体的抗原识别点的嵌合受体、一组与TCR缔合来形成抗原识别复合物的分子(例如，CD3)、T细胞表面抗原(例如，CD8和CD28)和这些的部分的基因，作为要导入T细胞的受体。

纤连蛋白是在血液中、在细胞表面上、在动物组织的细胞外基质中存在的高分子量糖蛋白，具有250,000的分子量，已知具有多种功能。在转移通过扩增CTL、外周血淋巴细胞等等获得的淋巴因子活化细胞的免疫治疗中，所述CTL、外周血淋巴细胞等等通过IL-2和抗CD3抗体的刺激离体地获得，已经检查了纤连蛋白或其片段对一些问题的作用，例如，如何离体诱导的抗原特异的CTL的扩增时维持细胞毒性活性，以及如何有效地离体扩增淋巴细胞(例如，专利文献1到3)。

近年来，已经报道的是，在免疫治疗中，通过向生物体施用处于更为未分化状态的幼稚T细胞或中央记忆T细胞，而不是施用终末分化的效应T细胞，可以预期更高得多的治疗效果(例如，非专利文献4和5)。此外，利用树突状细胞转移疗法、肽疫苗疗法等等，在其中抗原特异CTL的体内诱导是预期的，例如，在患有进展的癌症、被认为体内具有将成为CTL的祖代的小群体幼稚T细胞的患者中，常常不能获得足够的效果。

专利文献1：WO03/016511册

专利文献2：WO03/080817册

专利文献3：WO 2005/019450册

非专利文献1：Journal of Immunology，Volume 163，pp.507-513(1999)

非专利文献2：Journal of Immunology，Volume 170，pp.2186-2194(2003)

非专利文献3：Blood，Volume 103，pp.3530-3540(2003)

非专利文献4：Journal of Clinical Investigation，Volume 115，pp.1616-1626(2005)

非专利文献5：Journal of Immunology，Volume 175，pp.739-748(2005)

发明内容