[发明专利]DNA甲基化测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及对生物来源标本所含的基因组DNA中目标DNA区域中的被甲基化了的DNA含量进行测定的方法。

背景技術

作为用于评价生物来源标本所含基因组DNA中目标DNA区域中的DNA的甲基化状态的方法，例如，有测定在基因组DNA中目标DNA区域中的被甲基化了的DNA的含量的方法(例如，参照Nucleic Acids Res.1994 Aug 11；22(15)：2990-7、和Proc Natl Acad Sci USA.1997 Mar18；94(6)：2284-9)。在该测定方法中，首先需要从基因组DNA来源的DNA试样中提取含有目标DNA区域的DNA，提取操作十分繁杂。

另外，作为测定被提取的DNA的目标区域中的被甲基化了的DNA含量的方法，已知有以下的方法，例如(1)使用亚硫酸盐等修饰该DNA之后，将其供于DNA聚合酶引起的DNA合成的链反应(Polymerase ChainReaction(聚合酶链反应)；以下有时记为PCR)，从而将目标区域扩增的方法；(2)使用甲基化敏感性限制酶将该DNA消化后，将其供于PCR，从而使目标区域扩增的方法。这些方法的任一种中，用于甲基化的检测的DNA的修饰以及其后的生成物的精制、用于PCR的反应系的制备、DNA扩增的确认等中均需要耗时。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种简便测定生物来源标本所含的基因组DNA中目标DNA区域(以下，有时也记为目标区域)中的被甲基化了的DNA含量的方法。

即，本发明提供了以下所述的发明。

[发明1]

一种定量或检测方法，其是对生物来源标本中所含基因组DNA具有的目标DNA区域中的被甲基化了的DNA进行定量或检测的方法，其特征在于，具有以下工序：

第一工序，其中，将生物来源标本中所含具有目标DNA区域的基因组DNA来源的双链DNA分离成单链DNA；

第二工序，其中，将上述单链DNA、甲基化DNA抗体与特定寡核苷酸混合，形成该单链DNA与该甲基化DNA抗体与该特定寡核苷酸的复合体，该特定寡核苷酸不抑制该单链DNA中的被甲基化了的目标DNA区域与该甲基化DNA抗体结合，且含有与以下所示任一种碱基序列相互补的序列的一部分碱基序列；

第三工序，其中，基于上述复合体所含甲基化DNA抗体所具有的能利用于检测的识别功能而进行检测或定量，从而对生物来源标本中所含目标DNA区域中的被甲基化了的DNA进行检测或定量；

(1)序列编号1所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(2)序列编号2所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(3)序列编号3所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(4)序列编号4所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(5)序列编号5所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(6)序列编号6所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(7)序列编号7所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(8)序列编号8所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(9)序列编号9所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(10)序列编号10所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(11)序列编号11所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(12)序列编号12所示碱基序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(13)序列编号1所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(14)序列编号2所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(15)序列编号3所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(16)序列编号4所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(17)序列编号5所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(18)序列编号6所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(19)序列编号7所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、

(20)序列编号8所示碱基序列的互补序列或与其有80％以上的序列同一性的碱基序列、