[发明专利]1型核糖体失活蛋白的制备和应用

权利要求书

1.制备基本纯化的重组1型核糖体失活蛋白(RIP)的方法，包括：

获得包括至少部分重组1型RIP的蛋白序列；

采用表达1型RIP的基因序列合成编码1型RIP的核酸序列；

将核酸克隆到合适的表达载体；

转化表达载体到合适的蛋白表达系统中；

诱导重组1型RIP的表达；以及

基本纯化表达的重组1型RIP。

2.根据权利要求1所述的方法，其中蛋白表达系统包括无细胞表达系统。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中蛋白表达系统包括宿主细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其中宿主细胞包括大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和/或哺乳动物细胞。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中1型RIP包括南瓜蛋白。

6.根据权利要求5所述的方法，其中南瓜蛋白包括多聚组氨酸序列。

7.根据权利要求5所述的方法，其中南瓜蛋白包括南瓜蛋白的衍生物。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中1型RIP包括前南瓜蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其中前南瓜蛋白包括多聚组氨酸序列。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中1型RIP包括麻疯树核糖体失活蛋白(trichobakin)。

11.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中1型RIP包括ME1。

12.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中1型RIP包括美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)。

13.根据权利要求1-12任一项所述的方法，其中1型RIP不使宿主核糖体脱嘌呤。

14.根据权利要求1-13任一项所述的方法，其中约≥50％的重组1型RIP在可溶的部分。

15.根据权利要求1-14任一项所述的方法，其中重组1型RIP已经突变，因此不使宿主核糖体脱嘌呤。

16.根据权利要求1-15任一项所述的方法，其中1型RIP包括非糖基化的RIP蛋白。

17.根据权利要求1-16任一项所述的方法，其中1型RIP包括标签化的RIP蛋白，其中，标签用于纯化或在作治疗剂时用于直接靶向。

18.根据权利要求1-17任一项所述的方法，其中重组1型RIP用于治疗癌症或感染性疾病，包括对将受益于该治疗的个体施以有效量的含有重组1型RIP和/或其功能衍生物的组合物。

19.根据权利要求1-18任一项所述的方法制备得到的纯化表达的重组1型RIP或其衍生物。

20.含有权利要求19所述的纯化表达的重组1型RIP和药用载体介质的药物组合物。

21.适合用于治疗癌症、病毒感染或人类和非人类生物中的任何其它疾病的药物组合物，所述药物组合物包括有效量的天然或重组南瓜蛋白，或其功能衍生物，以及合适的药用载体介质。

22.重组南瓜蛋白衍生物，所述衍生物含有一个或几个与南瓜蛋白结合的配体，截短的南瓜蛋白多肽，或在其多肽序列中含有至少一个突变的南瓜蛋白多肽。

23.诱导癌细胞凋亡的方法，包括用至少部分纯化的重组南瓜蛋白或其功能衍生物的制剂处理癌细胞。

24.制备基本纯化的重组南瓜蛋白的方法，包括：

获得至少部分南瓜蛋白的核酸序列；

克隆核酸到合适的表达载体；

转化表达载体到合适的蛋白表达系统中；

诱导重组南瓜蛋白的表达；以及

基本纯化表达的重组南瓜蛋白。

25.根据权利要求24所述的方法，其中蛋白表达系统包括无细胞表达系统。

26.根据权利要求24或25所述的方法，其中蛋白表达系统包括大肠杆菌、麦胚或兔网织红细胞作为宿主细胞。

27.根据权利要求24-26任一项所述的方法，其中蛋白质表达系统包括宿主细胞。