[发明专利]经修饰的RNAi多核苷酸及其用途

权利要求书

1.用于抑制靶基因表达的长度为12至49个核苷酸的双链RNA(dsRNA)构建体，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有义链，其中所述有义链的所述5′和3′端各有一个或多个核苷酸具有2′修饰的核糖，和，

(2)具有5′端和3′端的反义链，其与所述有义链杂交并与所述靶基因的mRNA杂交，其中所述反义链在从该反义链5′端起的第二个核苷酸处包含2′修饰的核糖，

其中(a)所述dsRNA对Dicer的切割有抗性，(b)所述反义链与RISC结合，并且(c)所述dsRNA以序列依赖性方式抑制靶基因的表达。

2.用于抑制靶基因表达的长度为12-49个核苷酸的双链RNA(dsRNA)构建体，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有义链，其中所述有义链的所述5′和3′端各有一个或多个核苷酸具有2′修饰的核糖，和，

(2)具有5′端和3′端的反义链，其与所述有义链杂交以及与所述靶基因的mRNA杂交，其中所述反义链在该反义链的3′端包含：

(i)具有不可水解的核苷酸间连接的至少四个连续的2′-修饰核糖，

(ii)1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个2′修饰的核糖，优选2′-O-甲基修饰的核糖，或，

(iii)保护基，

其中(a)所述dsRNA对Dicer的切割有抗性，(b)所述反义链与RISC结合，并且(c)所述dsRNA以序列依赖性方式抑制靶基因的表达。

3.用于抑制靶基因表达的长度为12-49个核苷酸的双链RNA(dsRNA)构建体，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有义链，其中所述有义链的所述5′和3′端各有一个或多个核苷酸具有2′修饰的核糖，并且所述有义链在从该有义链3′端起的第二个核苷酸处包含错配核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反义链，其与所述有义链杂交并与所述靶基因的mRNA杂交，

其中(a)所述dsRNA对Dicer的切割有抗性，(b)所述反义链与RISC结合，并且(c)所述dsRNA以序列依赖性方式抑制靶基因的表达。

4.用于抑制靶基因表达的长度为12-49个核苷酸的双链RNA(dsRNA)构建体，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有义链，其中所述有义链的所述5′和3′端各存在四个连续的2′-O-甲基核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反义链，其与所述有义链杂交并与所述靶基因的mRNA杂交，其中所述反义链：

(a)包含具有硫代磷酸酯连接的至少四个连续2′-O-甲基修饰的3′端核苷酸；或，

(b)在5′端第二个核苷酸处包含2′-O-甲基修饰的核苷酸，并且没有其他经修饰核苷酸，

其中(a)所述dsRNA对Dicer的切割有抗性，(b)所述反义链与RISC结合，并且(c)所述dsRNA以序列依赖性方式抑制靶基因的表达。

5.用于抑制靶基因表达的长度为12-49个核苷酸的双链RNA(dsRNA)构建体，所述dsRNA包含：

(1)具有5′端和3′端的有义链，其中所述有义链在5′端和3′端分别包含12个和10个连续的2′-O-甲基核苷酸，和，

(2)具有5′端和3′端的反义链，其与所述有义链杂交并与所述靶基因的mRNA杂交，其中所述反义链：

(a)是未修饰的；

(b)包含具有硫代磷酸酯连接的至少四个连续的2′-O-甲基修饰3′端核苷酸；或，

(c)在5′端第二个核苷酸处包含2′-O-甲基修饰的核苷酸，并且没有其他经修饰核苷酸，

其中(a)所述dsRNA对Dicer的切割有抗性，(b)所述反义链与RISC结合，并且(c)所述dsRNA以序列依赖性方式抑制靶基因的表达。

6.根据权利要求1-5中任一项的dsDNA，其中所述反义链指导靶基因mRNA在从反义链5′端起第10和第11个核苷酸之间的单个位点发生均一切割。

7.根据权利要求1-5中任一项的dsDNA，其中所述dsRNA的有义链可在从有义链3′端起第10和第11个核苷酸之间的单个位点被RISC切割。

8.根据权利要求1-5中任一项的dsDNA，其中所述dsRNA构建体是平末端的。