[发明专利]生产生物活性HIV-1 TAT蛋白的方法在审
| 申请号： | 200980111208.8 | 申请日： | 2009-02-06 |
| 公开（公告）号： | CN102007141A | 公开（公告）日： | 2011-04-06 |
| 发明（设计）人： | 芭芭拉·恩索利;毛罗·马格纳尼 | 申请（专利权）人： | 国家高等卫生院;乌尔比诺大学 |
| 主分类号： | C07K14/16 | 分类号： | C07K14/16;C12N15/70 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 意大*** | 国省代码： | 意大利;IT |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 生物 活性 hiv tat 蛋白 方法 | ||
1.用于制备生物活性Tat的方法，所述方法包括培养在诱导时能够表达Tat的宿主生物体，并且其中Tat的表达是在所述宿主生物体的对数生长期过程中诱导的。
2.按照权利要求1的方法，其中生物活性的量度是Tat被单核细胞来源的树突细胞摄取的能力。
3.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体容易允许大体积培养。
4.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体是真核细胞。
5.按照权利要求4的方法，其中所述宿主生物体是细菌或酵母。
6.按照权利要求5的方法，其中所述宿主生物体是酿酒酵母(S.cerevisiae)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、或大肠杆菌(E.coli)。
7.按照权利要求6的方法，其中所述宿主生物体是大肠杆菌BL21菌株。
8.按照前述权利要求中任一项的方法，其中由培养的宿主获得的表达产物与本领域中已证明是生物活性的Tat相同，或基本上相同。
9.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat为SEQ ID NOs.2或3所示，或为其具有生物活性且与所述序列具有至少70％序列同源性的突变体或变体。
10.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主生物体已经使用适当的表达质粒转化。
11.按照前述权利要求中任一项的方法，其中编码Tat的序列处于可诱导启动子的控制下。
12.按照前述权利要求中任一项的方法，其中所述启动子仅被特异性聚合酶识别，所述特异性聚合酶受到可诱导启动子的控制。
13.按照权利要求11或12的方法，其中所述启动子是lac启动子。
14.按照权利要求11-13中任一项的方法，其中所述编码Tat的序列处于T7启动子的控制下。
15.按照权利要求14的方法，其中所述宿主生物体能够表达T7 RNA聚合酶，并且其处于lac启动子的控制下。
16.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.4-0.9范围内、包括端点值的OD处诱导。
17.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.45-0.8范围内、包括端点值的OD处诱导。
18.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在0.5-0.7范围内、包括端点值的OD处诱导。
19.按照前述权利要求中任一项的方法，其中Tat的表达在约为0.6的OD处诱导。
20.按照前述权利要求任一项获得的Tat。
21.用于生产单体Tat的方法，所述方法包括培养在诱导时能够表达Tat的宿主生物体，并且其中Tat的表达是在所述宿主生物体的对数生长期过程中诱导的。
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