[发明专利]△4去饱和酶及其在制备多不饱和脂肪酸中的用途

权利要求书

1.分离的核酸分子，所述分离的核酸分子选自：

(a)编码选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4的Δ4去饱和酶的分离的核苷酸序列；

(b)在如下杂交条件下与(a)杂交的分离的核苷酸序列：0.1XSSC、0.1％SDS，65℃以及用2X SSC、0.1％SDS洗涤，之后用0.1X SSC、0.1％SDS洗涤；

(c)与(a)或(b)完全互补的分离的核苷酸序列；和

(d)包含第一核苷酸序列或第二核苷酸序列的分离的核酸分子，所述第一核苷酸序列编码至少514个氨基酸的Δ4去饱和酶，所述Δ4去饱和酶基于Clustal W比对方法在与具有如SEQ ID NO：2所示的序列的多肽进行比较时具有至少68％的同一性；所述第二核苷酸序列包含所述第一核苷酸序列的互补序列。

2.权利要求1的分离的核酸分子，其中至少191个密码子经密码子最优化以便在耶氏酵母属中表达。

3.权利要求1的分离的核酸分子，所述分离的核酸分子选自SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：3。

4.编码Δ4去饱和酶的多肽，所述Δ4去饱和酶选自SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：4。

5.包含权利要求1的分离的核酸分子的嵌合基因，所述分离的核酸分子可操作地连接至至少一种调控序列。

6.宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求1的分离的核酸序列并且优选选自酵母；优选选自耶氏酵母属、假丝酵母属、红酵母属、红冬孢酵母属、隐球酵母属、丝孢酵母属和油脂酵母属的含油酵母；藻类；细菌；类眼虫；原生藻菌；真菌和优选选自大豆、谷物、亚麻、油菜籽、报春花、卡诺拉、玉米、棉花、红花、和向日葵的植物。

7.包含权利要求1的分离的核酸分子的转化过的耶氏酵母属物种。

8.制备多不饱和脂肪酸的方法，所述多不饱和脂肪酸选自二十二碳六烯酸和全-顺式-4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸(22:5，w-6)，所述方法包括：

a)提供宿主细胞，所述宿主细胞包含：

(i)编码Δ4去饱和酶多肽的分离的核苷酸分子，所述Δ4去饱和酶多肽基于Clustal W比对方法在与具有如SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列的多肽进行比较时具有至少68％的同一性；和

(ii)选自全-顺式-7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(22:5，w-3)和二十二碳四烯酸的源脂肪酸；

b)使步骤(a)的宿主细胞在表达编码所述Δ4去饱和酶多肽的核酸片段并且将所述源脂肪酸转化成选自全-顺式-7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(22:5，w-3)和二十二碳四烯酸的多不饱和脂肪酸的条件下生长，

使得当全-顺式-7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸(22:5，w-3)是所述源脂肪酸时，则二十二碳六烯酸是所产生的多不饱和脂肪酸；并且

当二十二碳四烯酸是所述源脂肪酸时，则全-顺式-4，7，10，13，16-二十二碳五烯酸(22:5，w-6)是所产生的多不饱和脂肪酸；和

c)任选地回收步骤(b)中产生的多不饱和脂肪酸。

9.权利要求8的方法，其中所述分离的核酸分子编码具有选自SEQID NO：2和SEQ ID NO：4的氨基酸序列的Δ4去饱和酶多肽。

10.权利要求9的方法，其中：

a.)所述分离的核酸分子具有选自SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3的核酸序列；并且宿主细胞选自：藻类；细菌；酵母；优选选自耶氏酵母属、假丝酵母属、红酵母属、红冬孢酵母属、隐球酵母属、丝孢酵母属和油脂酵母属的含油酵母；原生藻菌；类眼虫；真菌；植物细胞和动物细胞。