[发明专利]流感病毒疫苗抗原制备方法的改进

说明书

本申请要求美国临时申请61/069,868(2008/3/18提交)的优先权，其全部内容被纳入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及流感疫苗制备领域。

背景技术

参考文献1的第17和18章描述了目前常规使用的流感疫苗。它们基于活病毒或灭活病毒，灭活疫苗可以基于完整病毒、′裂解′病毒或纯化的表面抗原(包括血凝素以及也是通常使用的神经氨酸酶)。

已知有许多不同的制备裂解抗原疫苗和表面抗原疫苗的方法。例如，各种裂解过程如参考文献2-8所述，而制备表面抗原疫苗的不同方法披露于参考文献9-14。

本发明的目的是提供制造裂解疫苗和表面抗原疫苗的改良方法。

发明内容

发明人曾经对现有的从裂解的流感病毒制备疫苗抗原的方法设计了许多改进。

去污剂使用时间的改进

在现有纯化方法中，流感病毒颗粒先接触第一去污剂(例如聚山梨酸酯，如聚山梨酸酯80)，然后用第二去污剂(例如CTAB)裂解。第一去污剂在病毒灭活之前使用，而第二去污剂在灭活之后加入。在上述方法中，第二去污剂随后除去，而第一去污剂仍旧保留，从而有助于抗原溶解。

相反，根据本发明的第一个方面，第一去污剂较晚使用，具体地说是在已经用第二去污剂裂解病毒颗粒之后。这种时间和顺序的变化使得抗原产量提高了20倍以上，尤其是对于H5亚型的甲型流感病毒。

因此，本发明提供了一种分裂流感病毒颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在不存在去污剂时获得包含流感病毒颗粒的组合物；(ii)在不存在去污剂时灭活所述流感病毒颗粒；(iii)用包含第一去污剂的试剂裂解灭活的病毒颗粒；和(iv)用第二去污剂交换第一去污剂。所述去污剂交换步骤可在裂解步骤之后的任何时刻进行，但在病毒颗粒捕获步骤之前进行较为理想，所述捕获步骤可通过以下方法进行，例如，亲和捕获、伪亲和捕获、层析或吸附(见下文)。因此，第二去污剂可在裂解之后但在病毒颗粒捕获之前加入。可在病毒颗粒捕获之后再加入额外量的第二去污剂，尤其是如果之前加入的第二去污剂的量小于1.5g/L时。

通过这种方法获得的分裂的病毒颗粒可用于制备流感疫苗。

本发明还提供了一种分裂流感病毒颗粒的方法，改进之处在于：在不存在去污剂时灭活流感病毒颗粒；用包含第一去污剂的试剂裂解灭活的病毒颗粒；以及在裂解后用第二去污剂交换第一去污剂。

在第一方面的其它实施方式中，所述第二去污剂是在灭活之后但在裂解之前加入的。因此，本发明提供了一种分裂流感病毒颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在不存在去污剂时获得包含流感病毒颗粒的组合物；(ii)在不存在去污剂时灭活所述流感病毒颗粒；(iii)加入第二去污剂但不裂解灭活的病毒颗粒；(iv)在存在第二去污剂时用包含第一去污剂的试剂裂解灭活的病毒颗粒；和(v)除去第一去污剂同时保留第二去污剂。

通过这种方法获得的分裂的病毒颗粒可用于制备流感疫苗。

本发明还提供了一种分裂流感病毒颗粒的方法，改进之处在于：在不存在去污剂时灭活所述流感病毒颗粒；在存在第二去污剂时用包含第一去污剂的试剂裂解灭活的病毒颗粒；以及在裂解之后除去第一去污剂同时保留第二去污剂。

在改进去污剂使用时间的还有其它实施方式中，去污剂是在病毒颗粒灭活之前、但在对病毒颗粒进行超滤/渗滤步骤之后加入的。因此，本发明提供了一种分裂流感病毒颗粒的方法，所述方法包括以下步骤：(i)在不存在去污剂时获得包含流感病毒颗粒的组合物；(ii)对含有病毒颗粒的组合物进行超滤/渗滤；(iii)在滤过的含有病毒颗粒的组合物中加入去污剂但不裂解病毒颗粒；和(iv)灭活流感病毒颗粒。该方法还可包括步骤(v)：用去污剂裂解灭活的病毒颗粒。步骤(v)中使用的去污剂可以不同于步骤(iii)中使用的去污剂。可在步骤(v)之后加入额外量的与步骤(iii)中所用相同的去污剂，尤其是如果步骤(iii)中去污剂的加入量小于1.5g/L时。

在之前去污剂的加入量小于1.5g/L时再加入额外量的去污剂的实施方式中，额外的加入可在进一步超滤/渗滤步骤之前进行。

裂解过程的改进

流感疫苗的裂解过程涉及用增溶浓度的去污剂处理病毒颗粒。合适的去污剂包括聚山梨酸酯类(吐温类)[6]、曲通X-100[6，10，15]、溴化十六烷基三甲基铵(CTAB)[9，16]和脱氧胆酸盐[2，17]。