[发明专利]用以收集血液,优选是外周血,以生产干细胞的试剂盒

说明书

【技术领域】

本发明是有关于一种用以收集血液，优选是外周型血液，以生产成体干细胞的试剂盒。

【背景技术】

近年来，由于在至目前为止被视为不治之症的病症中的治疗获得的成功，使干细胞(stem cells)在治疗上的应用已受广泛认可。

然而，获取干细胞的已知方法耗时、费力且昂贵。

多能干细胞(pluripotent stem cells，PSC)是一可获取的来源，不仅用于研究，而且亦可用于创造药物及用于移植(Wagers A.J.等人，2002；Griffith L.G.等人，2002)。

现有胚胎及成体干细胞：前者衍生自8天大的囊胚(blastocysts)，同时成体干细胞则可主要获取自骨髓、脂肪或肌肉组织、外周血(peripheral blood)及脐带。

干细胞的定义是可不断的发展，在此时，并没有普遍的共识或标准的方法能用以分离它们或辨识它们。对所有这类细胞而言，胚胎(embryonic，ES)，及成体、造血(haemopoietic，HSC)及间质(mesenchymal，MSC)细胞两者(Kuwana M.等人，2003)，各种基因标记(market)已被辨识出来，其中的某些可共用于许多细胞类型(Condomines M.等人，2006；Kang W.J.等人，2006；Zhao Y.等人，2003；Rabinovitch M.等人，1976)。

此时，研究更被定向至由胚胎组织、胎儿及脐带分离出的干细胞的应用上，但其造成合法性及道德上的问题。

最重要的是，从今天起，这些干细胞的应用具有各种反向缺陷，例如：感染风险、移植时的被排斥风险，以及在某些哺乳动物(例如马)中发展为畸胎瘤(teratomas)。

为克服这些问题，于“在活体内(in vivo)”的治疗中，已知的为使用自体干细胞，优选分离自骨髓、脂肪组织或外周血。最初来自成体干细胞，通过透导分化的特异性因子在所需的细胞株内作用可使干细胞“在试管内(in vitro)或在活体外(ex vivo)”进行分化步骤，及获得的分化后细胞株随后可进行移植步骤。在这些方法中，由于分化细胞被重新引入相关生物体内却不被辨识为自身细胞，而具有排斥现象的缺点，其起因于它们在在试管内诱导分化的步骤中失去了自身辨识的因子。

在人体中，由外周血取出干细胞必需通过称为血液分离术(aphaeresis)或自细胞单采术(1eucoaphaeresis)的工艺来确保其纯度。细胞由由血液中萃取、收集，接着在化学治疗或放射线治疗后立刻接种(inoculated)至病患体内。

在血液分离术中，其持续6至8小时，血液由手臂静脉或由颈部或胸部的静脉中取出，并通过移除干细胞的机器。血液因此被纯化，并返回病患体内，然而收集到的细胞则通过液态氮来冷冻保存(Condomines M.等人，2006；Kang WJ.等人，2006)。此技术，除了痛苦外，亦对病患造成极大压力。最重要的是，此技术未对循环中的干细胞提供真实的区别性及/或纯化。已知的主要纯化技术为：

-使用生长因子或血小板衍生物(TGF-B、VEGF)，但萃取这些因子的经济成本过于昂贵(Hou M.等人，2006)。

-分离出取自骨髓的干细胞，其可以纯化及因而纯15％含在萃取材料内的细胞可用于治疗；

-由脂肪组织分离出干细胞，其需要来自捐赠者先前手术切除的大量组织，且不容许静脉注射；

-IGF-I(类胰岛素生长因子1)，亦称为Tendotrophin(Fiedler J.等人，2006)；

-UBM(膀胱基质)：此为猪只的衍生物，含有细胞激素(但非核细胞)，其诱导伤口的结疤愈合，但非损伤区域的再生(Zhang YS等人，2005)。

另一已知方法由Zhao Y.等人揭露于″人类外周血单核细胞衍生子集做为多能干细胞(A human peripheral blood monocyte-derived subset acts as pluripotent stem cells)″文献及WO2004/043990的专利中。此是一种制备衍生自单核细胞的干细胞的方法，其包含的步骤是：由外周血分离出单核细胞；使其接触有丝分裂成分，接着在适合细胞增殖的条件下作用于来自外周血的单核细胞的培养物。

此方法，最初需要一分离单核细胞的步骤，及接着需要一在培养工具内的扩增步骤，其极为费时，约15至20天，以便获取有效数量的干细胞，且无法获取多能干细胞，也就是，无特异性且适合直接接种并在短时间后即进入病患体内者。