[发明专利]凝胶粒子测定装置

说明书

技术领域

本发明涉及一种凝胶粒子测定装置，该装置用于通过凝胶化反应使作为测定对象的试样中的内毒素和β-D-葡聚糖等目标物质粒子化之后再对其进行测定。

背景技术

所谓的内毒素(细胞内毒素)，主要是不被采用革兰氏染色法染色的(革兰氏阴性)细菌类的菌体的碎片，其成分是被称为脂多糖的脂质多糖类。具体地，是由被称作脂质A(Lipid A)的脂质和多糖链通过2-酮基-3-脱氧辛酸(KDO)结合而成的脂多糖(LPS)，其中含有的被称为脂质A(Lipid A)的脂质结构部分与细胞的受体相结合而引起炎症，在大多数情况下会引起各种各样的重度的临床症状。这样，内毒素是一种成为所谓败血症或菌血症等致死率高的临床症状的原因的物质，因此，对进入到体内的内毒素进行评估在临床上的要求很高。

另外，医药品(注射剂等)和医疗用具(血管导管等)等不被内毒素污染(无热原)是非常重要的，在使用细菌制备的医药物品(在重组蛋白质、基因治疗中使用的DNA等)中，完全除去内毒素是不可缺少的。

这种内毒素的除去确认或者急救医学中的计测，不仅要求测定的试样数多，而且还要求以救命治疗为目的的迅速性。

为了治疗败血症等，测量内毒素值的研究很早就开始了，人们发现鲎(Limulus)的阿米巴样血细胞成分中所含的基因组与内毒素发生特异反应而凝胶化，并据此尝试使用该鲎的水解物(Limulus Amebocyte Lysate(鲎的变形细胞溶解物)；LAL试剂或者鲎试剂)对内毒素进行定量测定。

最初的使用鲎试剂的测定法，仅仅是将其与作为试样的患者血浆混合后静置，在一定时间后倒转过来，通过溶液的凝固来确认是否凝胶化，根据引起凝胶化的最大稀释率来推算内毒素量，这就是所谓的凝胶化法。

随后，人们着眼于在凝胶化反应过程中浊度的增加，用采用光学测量方法的浊度计，根据伴随凝胶化反应的浊度变化来测定内毒素浓度，这是已知的比浊时间分析法。

而且，还已知有发色合成底物法，该方法是将鲎试剂反应过程的最终阶段的凝固蛋白原(Coagulogen)转换为凝固素(Coagulin)的凝胶化反应置换为合成底物的发色反应。该方法是通过加入发色合成底物(Boc-Leu-Bly-Arg-对硝基苯胺)来代替凝固过程中的凝固前体物质(凝固蛋白原)，在其水解中使对硝基苯胺游离，利用其黄色发色的比色测定内毒素浓度。

进而，作为以往的凝胶化反应测定装置或者与其相关的测定装置，可举出例如专利文献1、2所示的装置。

专利文献1虽然与凝胶化反应测定装置无关，但是能够随着血中的血小板凝聚成块的长大过程，测定血小板凝块的大小和数目，从激光光源向试样池内的试样照射光，用光检测器检测在血小板上向90度侧方散射的散射光的一部分，基于该检测结果，测定血小板凝块的大小和数目。

另外，专利文献2涉及采用比浊时间分析法的凝胶化反应测定装置，测定由检品(试样)与鲎试剂混合而成的混合液的透射光强度的经时变化，根据规定时间内的变化量测定检品的内毒素浓度。

此外，利用凝胶化反应的测定技术，不仅可以用于上述的内毒素的测定，而且也可以用于β-D-葡聚糖(β-D-glucan)等的测定。

β-D-葡聚糖为构成具有真菌特征的细胞膜的多糖(多糖体)。通过测定β-D-葡聚糖，不仅是诸如念珠菌、曲霉、或隐球菌这类的一般在临床上常见的真菌，而且在含有稀有真菌的广大范围内对真菌感染症的筛分等有效。

在β-D-葡聚糖的测定中，利用β-D-葡聚糖来使鲎的血细胞提取成分凝胶化，然后采用上述的凝胶化法、比浊时间分析法或发色合成底物法来进行测定。

内毒素和β-D-葡聚糖的测定方法具有共同点，例如，使用大致相同的测定硬件，通过从鲎的血细胞提取成分中除去G因子(Factor G)成分，能够对内毒素选择性地测定凝胶化反应或发色反应，而且由于通过前处理使试样中的内毒素失活，因此能够对β-D-葡聚糖选择性地测定凝胶化反应或发色反应。

专利文献1：专利第3199850号公报(实施例，图1)

专利文献2：特开2004-93536号公报(发明的实施方式，图3)

发明内容

发明要解决的课题

然而，在现有的凝胶化法、比浊时间分析法和发色合成底物法中存在下述缺点。